諾博萊德 磷酸化蛋白提取試劑盒 

NobleRyder  BC1518 磷酸化蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1518

產(chǎn)品名稱：磷酸化蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T / 100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：磷酸化蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light，at least 1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder  BC1518 磷酸化蛋白提取試劑盒產(chǎn)品介紹

磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強(qiáng)烈，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成：

操作方法:
在 1mL 的冷裂解液中各加入 10µL 的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和 PMSF；混勻，放置在冰上備 用；

1、組織總蛋白的提取

1) 稱取 0.1g 的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然 后加入 0.5-1mL 的新配置的裂解液，研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊，這個(gè)過(guò)程注意冰上操作；

2) 將組織勻漿液移入 1.5mL 的 EP 管中，4 ℃ 12000g 離心 30min；

3) 吸取上清至新的管中；

4) 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 （提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。）

2、細(xì)胞總蛋白的提取

1) 裂解液的用量：10⁷個(gè)細(xì)胞需要裂解液 1mL；

2) 貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的 PBS 洗兩次，棄去 PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入 EP 管中，顛倒裂解 20-30min。

3) 懸浮細(xì)胞：4℃ 400g 離心收集細(xì)胞，用冷的 PBS 洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解 10min，重復(fù) 3-4 次；

4) 裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液 4 ℃12000g 離心 30min；

5) 將上清移入新的 EP 管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 （提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。）

注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境；2、PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

諾博萊德 磷酸化蛋白提取試劑盒