諾博萊德 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒

NobleRyder P4935 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：P4935

產(chǎn)品名稱：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P4935 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒

適用樣本：動物細胞/組織

產(chǎn)品介紹

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為由生物膜構(gòu)成的互 相通連的片層隙狀或小管狀系統(tǒng)，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質(zhì) 之間不直接相通。這種細胞內(nèi)的膜性管道系統(tǒng)一方面構(gòu)成細胞內(nèi)物質(zhì)運輸?shù)耐?，另方面?細胞內(nèi)各種各樣的酶反應(yīng)提供廣闊的反應(yīng)面積。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能與蛋白質(zhì)的合成、糖類和脂類 的合成、解毒、同化作用有關(guān)，并且還具有運輸?shù)鞍踪|(zhì)的功能。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)的提取。 本試劑盒適用于各種粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的提取。

本試劑盒可以用于完整內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取相關(guān)的實驗，也可以用于下游內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取等實驗。

注：

1. 提取液長期不用時置于-20℃保存 ，15 天內(nèi)要多次使用的話置 4℃保存即可。

2. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為由生物膜構(gòu)成的互 相通連的片層隙狀或小管狀系統(tǒng)，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質(zhì)之間不直接相通。這種細胞內(nèi)的膜性管道系統(tǒng)一方面構(gòu)成細胞內(nèi)物質(zhì)運輸?shù)耐?，另方面為細胞?nèi)各種各樣的酶反應(yīng)提供廣闊的反應(yīng)面積。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能與蛋白質(zhì)的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關(guān)，并且還具有運輸?shù)鞍踪|(zhì)的功能。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒可用于各種動物細胞和組織樣本的完整內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取，也可以用于下游內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取等實驗。

本試劑盒適用于各種粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的提取。

本試劑盒可以用于完整內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取相關(guān)的實驗，也可以用于下游內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取等實驗。

本試劑盒需要使用高速離心，沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒（EX2690）。

自備試劑及設(shè)備

離心機、振蕩器、勻漿機/Dounce 勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套 、細胞篩

使用方法（僅供參考）：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，用普通 1ml 玻璃勻漿器勻漿也可，但是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)回收率可能會下降。

4. 要求離心力 50000g 的離心，沒有條件的話可以采用 30000g -50000g 離心力，最好能達到 45000g 左右。最小離心力需要保證 30000g。

5. 如果需要回收所有光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小泡，最后一個離心步驟的離心力需要提高到 100000g 力。

6. 離心機轉(zhuǎn)速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機設(shè)置有 RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：g=r×1.118×10^-5×rpm²（r 為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米)

例如: 轉(zhuǎn)速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、操作步驟

細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提?。?/span>

1. 取 1-2×107 個細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞；

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

1. 在 500×g 條件下離心 5 分鐘。

3. 加入 500 μl-1 ml 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 30-40 下。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，11000×g 力條件下離心 10 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1. 如果條件允許，可將離心力加大到 100000×g，有利于提高光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小泡回收率。

2. 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

3.沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒（EX2690）。

4.沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

8. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

9. 在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。

【注】：

1. 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

2.沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒（EX2690）。

3. 如果期望回收所有光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小泡，離心力需要提高到 100000×g 力。

10. 棄上清，沉淀用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)保存液重懸。

【注】：

1.也可不用試劑盒中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)保存液重懸，根據(jù)下游實驗需要選擇合適的緩沖液重懸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或直接用于下游實驗。

2. 需要提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白時可以直接在沉淀中加入適量蛋白裂解液進行裂解。

3. 沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

11. 即得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提?。?/span>

1. 取 50 mg -100 mg 新鮮動物組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用剪dao盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

【注】：

1. 在 500×g 條件下離心 5 分鐘。

3. 加入 500 μl-1 ml 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 下，至無明顯固體團塊。然后在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。

5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。

6. 在 4℃，11000×g 力條件下離心 10 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1. 如果條件允許，可將離心力加大到 100000×g，有利于提高光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小泡回收率。

2. 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

3. 沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒（EX2690）。

4. 沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

8. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

9. 在 4℃，50000×g 力條件下離心 45 分鐘。

【注】：

1. 如果用大的離心轉(zhuǎn)頭，液體量太少不好離心的話，可以添加 PBS 增加液體量。

2. 沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒（EX2690）。

3. 如果期望回收所有光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小泡，離心力需要提高到 100000×g 力。

10. 棄上清，沉淀用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)保存液重懸。

【注】：

1. 也可不用試劑盒中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)保存液重懸，根據(jù)下游實驗需要選擇合適的緩沖液重懸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或直接用于下游實驗。

2. 需要提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白時可以直接在沉淀中加入適量蛋白裂解液進行裂解。

3.沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

4. 即得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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產(chǎn)品訂購信息：

P4935  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒  50T/100T