諾博萊德 胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

NobleRyder P4957 胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：P4957

產(chǎn)品名稱：胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4957 胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代培養(yǎng)動物細(xì)胞和各種動物實(shí)體組織樣品中提取胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白。本試劑盒含有的獨(dú)te配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于esternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細(xì)胞的能力較溫和，需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時(shí)間。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：動物細(xì)胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代培養(yǎng)動物細(xì)胞和各種動物實(shí)體組織樣品中提取胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白。本試劑盒含有的獨(dú)te配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份。

本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細(xì)胞 的能力較溫和，需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時(shí)間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、提取過程簡單方便。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

二、細(xì)胞蛋白提取

1. 提取液制備：

每 200μl 蛋白提取液 A 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 200μl 蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞，在4℃，1000×g 條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 5-10×106個(gè)細(xì)胞中加入 400μl 冷的提取液 A，高速渦旋振蕩 15 秒或吹打混勻，置 2- 8℃條件振蕩 20-30 分鐘。

5. 然后在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

7. 沉淀用 200μl PBS 洗滌一次，在 4℃，5000×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

8. 在沉淀中加入 100μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 5 秒。

9. 置 2-8℃條件振蕩 20 分鐘。

10. 在 4℃，16000×g 條件下離心 15 分鐘。

11. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。留沉淀用于下步的組蛋白/染色質(zhì)相關(guān)蛋白提取。

12. 在沉淀中加入 100μl 組蛋白提取液 C，充分混勻。

13. 用 200μl 槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置 4℃冰箱過夜存放。

14. 在 12000×g 條件下離心 10 分鐘，收集上清。

15. 在上清中加入 10-20μl 試劑 D 充分混勻，即得到組蛋白。

16. 在組蛋白樣品中加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

三、組織蛋白提取

1. 提取液制備：

每 200μl 蛋白提取液 A 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 200μl 蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取適量組織樣本，用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加冷 PBS，用組織勻漿機(jī)/勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體，冰上靜置 5 分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。

3. 在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

4. 每 20-30μl 細(xì)胞沉淀體積（20mg 組織）中加入 200μl 冷的提取液 A，高速渦旋振蕩 15 秒或吹打混勻，置 2-8℃條件振蕩 20-30 分鐘。

5. 然后在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

7. 沉淀用 PBS 洗滌一次，在 4℃，5000×g 條件下離心 5 分鐘，棄上清。

8. 在沉淀中加入 100-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 5 秒。

9. 置 2-8℃條件振蕩 30 分鐘。

10. 在 4℃，16000×g 條件下離心 10-15 分鐘。

11. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。留沉淀用于下步的組蛋白/染色質(zhì)相關(guān)蛋白提取。

12. 在沉淀中加入 100μl 組蛋白提取液 C，充分混勻。

13. 用 200μl 槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置 4℃冰箱過夜存放。

14. 在 12000×g 條件下離心 10 分鐘，收集上清。

15. 在上清中加入 10-20μl 試劑 D 充分混勻，即得到組蛋白。

16. 在組蛋白樣品中加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品訂購信息：

P4957  胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒  50T/100T