諾博萊德 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

NobleRyder P5002 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）

產(chǎn)品貨號(hào)：P5002

產(chǎn)品名稱：革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5002 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）

適用樣本：革蘭氏陽性菌

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

革蘭氏陽性菌總蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陽性菌菌體中提取總蛋白，試劑盒適用各種革蘭氏陽性菌以及各種厚壁菌體的蛋白提取，也可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過程簡單方便。

本試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，可以用于不同的下游應(yīng)用。根據(jù)不同的菌液樣本以及不同的培養(yǎng)狀況，每毫升菌液大概可以提得 2-10mg 蛋白。采用 BCA或 Lowry 法進(jìn)行蛋白定量。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，需要除鹽后再用于 2D 電泳。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，不需昂貴設(shè)備。

2、可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

4、采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

6、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

7、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

8、本試劑盒中不有 EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3、蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4、可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5、本試劑盒中提取液和蛋白酶抑制劑中均不含 EDTA，根據(jù)需要可自行加入。

二、革蘭氏陽性菌蛋白提取：

1. 提取液的準(zhǔn)備：

根據(jù)所需要提取的樣本量，每 500 μl 提取液 A 中加入 2 μl 蛋白酶抑制劑和 5 μl 蛋白穩(wěn)定液，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 在 4℃，10000×g 條件下將菌液離心 5 分鐘，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

3. 用 PBS 洗菌體 2 次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。

4. 按每 100 mg 濕重菌體樣本加入 500 μl 蛋白提取液，吹打混勻，冰上放置 20-30 分鐘。

【注】：

1) 細(xì)胞數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整，每次的裂解液用量并不是一定的，請根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。

2) 加入菌體體積的 3-5 倍體積的提取液，充分淹沒菌體即可。

5. 在 150-300 w，10 s 超聲/10 s 間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。

【注】：

1) 若無超聲條件，可不超聲，將提取液 A 置研缽研磨。若無研磨條件可以不研磨。

2) 若無超聲，將提取液在室溫或 37℃持續(xù)振蕩 1-2 小時(shí)。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

4) 如果沒有振蕩條件，可以在室溫或 37℃靜置，稍微延長提取液處理時(shí)間，中間每隔 10分鐘渦旋振蕩混勻。

5) 超聲時(shí)間盡量短，提取液變清即可，一般不超過 20 分鐘。

6) 如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說明超聲功率過大，需要降低功率。

7) 避免產(chǎn)生泡沫。

6. 在 4℃，12000×g 條件下將提取液離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清移入另一干凈離心管，即得革蘭氏陽性菌蛋白樣品。

8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

 革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品訂購信息：

P5002  革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）  50T/100T