諾博萊德 SABC(小鼠IgG)-POD kit  SABC法

NobleRyder SA8899 SABC(小鼠IgG)-POD kitSABC(Mouse IgG)-POD Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：SA8899

產(chǎn)品名稱：SABC(小鼠IgG)-POD kitSABC(Mouse IgG)-POD Kit

英文名稱：SABC(Mouse IgG)-POD Kit

產(chǎn)品規(guī)格：kit

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder SA8899 SABC(小鼠IgG)-POD kitSABC(Mouse IgG)-POD Kit 適合于一抗為小鼠IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)DAB顯色。

SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生wu素有極gao的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（PI=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大約可形成一百個(gè)左右的過氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

操作步驟:（以石蠟切片為例）

1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。

2. 3% H2O2 室溫處理5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

3.可選步聚：

a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入 0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰 后斷電，間隔 5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。

b、酶消化，滴加消化液，37℃10分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3次。

c、跳過此步，直接進(jìn)入下一步。

4.  滴加5% BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 免洗。

5.  用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購(gòu)買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1小時(shí)左右或20℃ 2小時(shí)左右，也可4℃過夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。）

6． 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-羊抗小鼠IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗小鼠IgG濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 孵育30分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。

7．根據(jù)使用量，用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌4次，每次5

分鐘。

8．DAB顯色:根據(jù)用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A，加入50ul 20×DAB顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。

9．蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。

對(duì)于細(xì)胞爬片，固定后，PBS漂洗兩次，再用0.5% Triton X-100室溫孵育20分鐘，PBS漂洗兩次，3% H2O2處理15分鐘；PBS漂洗兩次，接上述第4步。

10．對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，接上述第二步。

注意事項(xiàng)：

如果染色背景過高，在SABC反應(yīng)之后，DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后DAB顯色。

SABC(小鼠IgG)-POD kit  SABC法

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