諾博萊德 NEB10-beta感受態(tài)細胞

NEB10-beta感受態(tài)細胞    載體構(gòu)建

產(chǎn)品貨號：C9338

產(chǎn)品名稱：NEB10-beta感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderC9338 NEB10-beta感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌NEB10-beta菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達108cfu/μg。

基因型:

araD139?(ara-leu)7697fhuAlacX74galK(f80?(lacZ)M15)mcrAgalUrecA1endA1nupGrpsL(StrR)?(mrr-hsd RMS mcrBC)

產(chǎn)品特點：

1. 大腸桿菌K12菌株背景，DH10B菌株的衍生菌株，核基因中具有鏈mei素抗性基因(StrR)。

2. 可轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒和BACs。

3. DNA重組缺陷(recA1)和內(nèi)切酶I缺陷(endA1)的特點有利于DNA克隆的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

4. 對T1噬菌體有抵抗能力（fhuA2）。

5. 無需添加IPTG，只加X-gal即可檢測β半乳糖苷酶活性，用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進行）

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。

2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻2分鐘，該過程不要搖動離心管。

4. 向每個離心管中加入500μL無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃150rpm，搖床振蕩培養(yǎng)60分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達，使菌體復(fù)蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的LB固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開。等平板中的液體wan全吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16小時。

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

注意事項：

1．感受態(tài)細胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。

2．實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到*低。

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C9338 NEB10-beta感受態(tài)細胞  20*100ul