產(chǎn)品簡介：

本試劑盒適用于檢測水樣糞便，疑似污染的水、食物等樣本中的霍亂弧菌 O139，用于霍亂弧菌 O139 感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。

產(chǎn)品特點：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的霍亂弧菌O139核酸，不放過任何潛在的感染風(fēng)險。

三、便捷操作

綜合各項指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于水樣糞便，疑似污染的水、食物等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊可為您提供個性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了霍亂弧菌O139（VC O139）熒光PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標(biāo)本采集

水樣便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g。

保存和運輸

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

水樣便 13000rpm 離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)-剪剪碎混勻后取 0.05g 于研磨器中研磨， 加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；疑似污染的水直接取 100μL

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請    按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份），每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑VC O139 反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）20μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）、stop 值（一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)），以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照），重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的霍亂弧菌O139（VC O139）熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護(hù)航！