諾博萊德 溶酶體蛋白提取試劑盒

溶酶體蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產品貨號：P4919

產品名稱：溶酶體蛋白提取試劑盒

產品規(guī)格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：溶酶體蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數(shù)以收到產品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P4919 溶酶體蛋白提取試劑盒

適用樣本：動物細胞/組織

產品介紹

溶酶體是由一層單位膜包圍，內含多種酸性水解酶的泡狀結構。溶酶體含有 40 多種水解 酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對細胞內物質的消化作用。此 外溶酶體與器官形成、激素分泌的調節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關。

溶酶體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的溶酶體蛋白提取。適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、 脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組 織中提取溶酶體總蛋白。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品介紹：

溶酶體是由一層單位膜包圍，內含多種酸性水解酶的泡狀結構。溶酶體含有40多種水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對細胞內物質的消化作用。此外溶酶體與器官形成、激素分泌的調節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關。

溶酶體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的溶酶體蛋白提取。適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中提取溶酶體總蛋白。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產品特點：

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2. 提取過程簡單方便。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一、使用注意事項

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

二、溶酶體蛋白提取

提取液準備：

每200μL冷的蛋白提取液C中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

細胞溶酶體蛋白提取

1. 取1-2×107個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3min，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。

2. 用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3. 加入500μL-1000μL冷的試劑A，置冰上振蕩10min。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。

5. 在4℃，1000×g條件下離心5min，棄沉淀，留上清。

6. 將上清在4℃，4000×g條件下離心10min，棄沉淀，留上清。

7. 將上清在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

8. 在沉淀中加入500μL冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

10. 在沉淀中加入100-200μL蛋白提取液C，充分混勻。

11. 輕微振蕩15-30min。

12. 在4℃，12000×g條件下離心15min。。

13. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到溶酶體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

組織溶酶體蛋白提?。?/span>

1. 取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。

3. 加入500μL-1000μL冷的試劑A，置冰上10min。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下，至無明顯可見固體。

5. 在4℃，1000×g條件下離心5min，棄沉淀，留上清。

6. 將上清在4℃，4000×g條件下離心10min，棄沉淀，留上清。

7. 將上清在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

8. 在沉淀中加入500μL冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，20000×g條件下離心20min，棄上清，留沉淀。

10. 在沉淀中加入100-200μL蛋白提取液C，充分混勻。

11. 輕微振蕩15-30min。

12. 在4℃，12000×g條件下離心15min。

13. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到溶酶體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低?

溶酶體蛋白豐度較低，需要足夠的樣品量才能得到足夠的蛋白，在條件允許的情況下，適當增加細胞

或組織樣本的上樣量。處理部分組織樣本時可能沒有裂解wa全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白?

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑C中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3. 提取的蛋白具有活性嗎?

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

溶酶體蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產品訂購信息：

P4919  溶酶體蛋白提取試劑盒  50T/100T