BD6036 線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)檢測試劑盒 抗氧
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BD6036
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/4/4 14:06:15
- 訪問次數(shù) 78
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BD6036 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)檢測試劑盒 |
線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)檢測試劑盒說明書
熒光法 100T/96S
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體 95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。
正常情況下，細胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現(xiàn)氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA 產(chǎn)生氧化損傷，導致線粒體ATP 合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。
測定原理：
熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體 膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的 DCFH，DCFH 迅速與ROS 反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS 產(chǎn)生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合，線性回歸直線斜率與ROS 產(chǎn)生的速率呈正比。
線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)檢測試劑盒 抗氧
組成：
產(chǎn)品名稱 | BD6036-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 120ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 1.5ml | -20℃ |
試劑四：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑五：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑六：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑七：液體 | 1 瓶 | -20℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6 ml 試劑二充分溶解；試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6 ml 試劑二充分溶解；
試劑六：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6 ml 試劑二充分溶解；
試劑七：液體×1 瓶, 保存；臨用前用試劑二稀釋 300 倍后使用；
自備儀器和用品：
多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。
線粒體提?。?/span>
1、準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將上述勻漿液于 600g（離心率），4℃離心 5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
4、棄上清，沉淀中加入 200μl 試劑二重懸。
測定步驟：
1、多功能酶標儀預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)激發(fā)光 499nm，發(fā)射光 521nm。
2. 在黑色不透光 96 孔板中加入下列試劑
試劑名稱（μl） | 測定管 | 空白管 |
線粒體懸液 | 20 | |
試劑二 | 20 | |
試劑四 | 50 | 50 |
試劑五 | 50 | 50 |
試劑六 | 50 | 50 |
試劑七 | 30 | 30 |
混勻，37℃避光孵育 15min。 | ||
孵育完成后，在 37℃恒溫下測定 10min 內(nèi)熒光強度，激發(fā)波長 499nm，發(fā)射波長 521nm，記錄 10min 內(nèi)的熒光值變化。
ROS 產(chǎn)生速率計算：
對采樣數(shù)據(jù)點即熒光強度隨時間的變化進行線性回歸擬合處理 ,計算出回歸系數(shù),即直線斜率（k）。實際線粒體ROS 產(chǎn)生速率等于樣本熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點線性回歸直線斜率(k 測定)減去本底熒光強度隨時間變的數(shù)據(jù)點線性回歸直線斜率（k 空白）。
(1) 按樣本鮮重計算：每 g 組織線粒體每秒鐘熒光單位的變化,即u/ s/g 鮮重
ROS 產(chǎn)生速率(u/ s/g 鮮重)=(k 測定-k 空白)/(V 樣÷V 總×W）=10×(k 測定-k 空白)÷W
(2) 按樣本蛋白濃度計算：每毫克蛋白線粒體每秒鐘熒光單位的變化 u/ s/mg prot。
ROS 產(chǎn)生速率(u/ s/ mg prot)=(k 測定-k 空白)/(V 樣÷V 總×Cpr）=10×(k 測定-k 空白)÷Cpr
V 樣：加入樣本體積，0.02 ml；V 樣總：懸液體積，0.2 ml；W: 樣本鮮重，g；Cpr: 樣本蛋白濃度，mg/ml。
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