土壤亞硝酸還原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

土壤亞硝酸還原酶試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關鍵酶之一，參與亞硝酸鹽至NO 的還原反應，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉化效率，為氮素轉化規(guī)律的研究提供一定的依據。

測定原理：

亞硝酸還原酶可將 NO2—還原為 NO，使樣品中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的 NO2—減少，即 540nm 處吸光值的變化可反應土壤中亞硝酸還原酶的活性。

試劑的組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 4ml 蒸餾水溶解。

試劑三：液體 4ml×1 瓶，4℃保存。（如出現沉淀可以 70-80℃加熱溶解）

試劑四：液體 10ml×1 瓶，4℃避光保存。（如出現沉淀可以 70-80℃加熱溶解）工作液：臨用前根據用量將試劑四和試劑五以 1:1 的比例混合。

自備儀器和用品：

天平、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、水浴鍋、低溫離心機。

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。

測定操作表：

計算公式：

使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 1.5562x+ 0.0088，R² = 0.996；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值（A 標準管-A空白管）。

酶活單位定義：每g 土樣每天還原 1μmol NO2ˉ 的量為一個酶活力單位。

S-NiR（μmol /d /g 土樣）=[A 空白管-(A 測定管-A 對照管) -0.0088]÷1.5562×V 標÷W÷T

= 0.617×[A 空白管-(A 測定管-A 對照管) -0.0088]÷W

T：反應時間，1h=1/24d；V 標：標準液體積，0.04ml；W：樣本質量，g。

使用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.7781x+ 0.0088，R² = 0.996；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值（A 標準管-A空白管）。

酶活單位定義：每g 土樣每天還原 1μmol NO2ˉ 的量為一個酶活力單位。

S-NiR（μmol /d /g 土樣）=[A 空白管-(A 測定管-A 對照管) -0.0088]÷0.7781×V 標÷W÷T

= 1.234×[A 空白管-(A 測定管-A 對照管) -0.0088]÷W

T：反應時間，1h=1/24d；V 標：標準液體積，0.04ml； W：樣本質量，g。

注意事項:

配制好的工作液 3 天內使用完。

若吸光值超過 1.5，將上清液進行適當的稀釋后再加入工作液顯色，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

嚴格控制顯色時間，否則會對結果有影響。

標準曲線線性范圍為 0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

A 空白管-（A 測定管-A 對照管）線性范圍為 0.02-1.5。

土壤亞硝酸還原酶試劑盒