?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

E14 細胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

E14細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持E14細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 E14 細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于E14細胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                                405mL

特級胎牛血清                                                    75 mL

 運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA 試劑盒

Human myosin (Myosin) ELISA Kit 人肌球蛋白(Myosin)試劑盒

Rabbitprothrombinfragme1+2,F1+2ELISAKit 兔原片段F1+2(F1+2)試劑盒分裝

CLIAKitforAi-TM甲狀腺微粒體抗體(TM抗體)

血小板因子4(PlateletFactorIV)活性熒光定量試劑盒20次

Porcineiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit豬細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)試劑盒

大鼠谷酰胺合成酶(GLUL)試劑盒 ，英文名： GLUL ELISA Kit

Rabbit ierleukin 8 (IL-8/CXCL8) ELISA Kit 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)試劑盒

大腸桿菌(O157:H7)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMIP-1Beta/CCL4(HumanMacrophageInflammatoryProtein-1Beta)ELISAkit人巨噬細胞性蛋白1β

體液科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定量PCR擴增試劑盒20次

ELISAKit5-HT犬5羥色胺

豬載脂蛋白B（Apo-B）試劑盒   組裝/原裝

豬載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒   組裝/原裝

豬孕（PROG）試劑盒   組裝/原裝

豬孕激素（P）試劑盒   組裝/原裝

5-三磷酸肌醇受體1抗體

周期素D2抗體

IL1R2重組大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 (His 標簽) Protein

GRP94 (gp96 0.5mgGRP94 (gp96) 94kDa 糖調(diào)節(jié)蛋白(抗原)

ANP32A重組人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

BLOC1S2 Protein Human 重組人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 標簽)

PGLYRP1 Protein Mouse 重組小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His?

E14 細胞專用培養(yǎng)基GRP94 (gp96 0.5mgGRP94 (gp96) 94kDa 糖調(diào)節(jié)蛋白(抗原)

BLOC1S2 Protein Human 重組人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 標簽)

IL1R2重組大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 (His 標簽) Protein

PGLYRP1 Protein Mouse 重組小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His 標簽)

ANP32A重組人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein