| 一、細(xì)胞基本屬性 |
| 細(xì)胞名稱 | BRL-3A大鼠肝細(xì)胞 |
| 細(xì)胞別稱 | BRL3A; BRL 3A; Buffalo Rat Liver-3A |
| 種屬來源 | 大鼠 |
| 組織來源 | 肝臟 |
| 生長特性 | 貼壁生長 |
| 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
| 背景介紹 | 這個細(xì)胞株的無血清條件培養(yǎng)基是MSA的一個來源。 MSA多肽家族能夠部分滿足雞胚成纖維細(xì)胞對血清的需求。 |
| 生物安全等級 | 1 |
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
| 支原體檢測 | 無 |
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-1442 BCRC; 60218 ECACC; 85111503 |
| 基因表達(dá)情況 | Somatomedin like multiplication stimulating activity (MSA) |
| 培養(yǎng)基 | 90% DMEM+10% FBS+雙抗 |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ |
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 |
| 細(xì)胞貨期 | 1-2周 |
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 |
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 |
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 |
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| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 |
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| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 |
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| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代
1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
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| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存；
2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 |
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| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
| 三.細(xì)胞凍存操作 |
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 |
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 |
| 凍存方法 | a、 收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
| 四、售后服務(wù) |
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 |
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 |
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