北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)
乳鐵蛋白測(cè)定新標(biāo)準(zhǔn)出爐!迪馬科技GB 5009.299-2024 最新解決方案發(fā)布
檢測(cè)樣品:牛奶
檢測(cè)項(xiàng)目:乳鐵蛋白
方案概述:迪馬科技參考《GB5009.299-2024食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測(cè)定》,使用磷酸鹽緩沖液提取試樣中的牛乳鐵蛋白,肝素免疫親和柱ProElutHPIAC富集凈化,反相高效液相色譜柱Bio-BondC4300Å色譜柱分離檢測(cè),回收率在85%-100%之間。
乳鐵蛋白因具有抗菌,抗氧化,抗癌,促進(jìn)腸道發(fā)育,促進(jìn)鐵吸收,以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等功能,故在乳制品及相關(guān)食品生產(chǎn)中均有不同程度的添加。2024年2月8日,國(guó)家衛(wèi)生健康委、市場(chǎng)監(jiān)管總局聯(lián)合印發(fā)2024年第1號(hào)公告,發(fā)布47項(xiàng)新食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和6項(xiàng)修改單。其中包含《GB 5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定》。
迪馬科技參考《GB 5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定》,使用磷酸鹽緩沖液提取試樣中的牛乳鐵蛋白,肝素免疫親和柱ProElut® HP IAC富集凈化,反相高效液相色譜柱Bio-Bond® C4 300Å色譜柱分離檢測(cè),回收率在85%-100%之間。
本方案適用食品中牛乳鐵蛋白的測(cè)定。
(1)磷酸鹽緩沖液Ⅰ:稱取 30.08g十二水合磷酸氫二鈉,2.50g二水合磷酸二氫鈉,加入800mL去離子水溶解,再加入20mL乳鐵蛋白提取劑*,用純水定容至1L,混勻。
(2) 磷酸鹽緩沖液Ⅱ:稱取15.04g十二水合磷酸氫二鈉,1.25g二水合磷酸二氫鈉,5.84g氯化鈉,加適量水溶解,定容至1L,混勻。
(3) 洗脫溶液:稱取7.1g十二水合磷酸氫二鈉,58.4g氯化鈉,用適量水溶解,并定容至1L。
*乳鐵蛋白提取劑隨貨(肝素免疫親和柱ProElut® HP IAC)附贈(zèng),可有效增加提取效率和凈化效率。
稱取5g樣品到50mL離心管中,加入25mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ,漩渦振蕩5min,然后在4℃,10000r/min條件下離心15min,去除上層奶脂用大量程移液器取出中間層10mL作為上樣液待凈化。
ProElut® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)
(1)活化:將10mL注射器連接于親和柱上端,放掉柱管保護(hù)液,取5mL磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化親和柱;
(2)上樣:取提取樣液10mL過(guò)柱凈化(控制流速1-3mL/min),棄去流出液;
(3)淋洗:溶液全部過(guò)柱后,加入10mL磷酸鹽緩沖溶液Ⅱ淋洗,甩干柱內(nèi)水分;
(4)洗脫:加入4mL洗脫溶液進(jìn)行洗脫并收集,洗脫液混勻過(guò)0.22μm水系濾膜,待液相色譜檢測(cè)。
色譜柱:Bio-Bond® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)
流速:1.0mL/min
進(jìn)樣量:50μL
柱溫:30℃
檢測(cè)器:PDA 280nm
流動(dòng)相:A:乙腈 B:0.1%三氟乙酸水溶液
梯度設(shè)置:
(1) 肝素親和柱隨貨附贈(zèng)了乳鐵蛋白提取劑,有效增加了提取效率和凈化效率。
(2) 液體牛奶樣品在50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg添加濃度水平上的回收率均大于85%,回收驗(yàn)證合格。
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