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色譜類型分析
閱讀：3538發(fā)布時(shí)間：2019-11-23
色譜是一種技術(shù)，通過(guò)該技術(shù)，樣品中的組分載入液相或氣相中，通過(guò)在固定相上由吸附—解吸附來(lái)完成。
一、 液相色譜 (HPLC)
HPLC分離是基于在樣品在流動(dòng)相液體和固定相之間的不同分配。一般地說(shuō)HPLC大體分為以下幾種(未考慮其重要性順序)
1. 手性液相色譜
分離光學(xué)異構(gòu)體可在手性固定相上，用衍生化試劑或在非手性固定相上用流動(dòng)相添加劑形成非對(duì)對(duì)映體來(lái)實(shí)現(xiàn)。用作雜質(zhì)試驗(yàn)方法時(shí)，如果光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)在光學(xué)異構(gòu)體藥物之前洗脫,要增加靈敏度。
2. 離子交換色譜
分離基于荷電功能團(tuán)，樣品負(fù)離子(X - )為陰離子，樣品正離子((X + )為陽(yáng)離子，一般用pH程序洗脫。
3. 離子對(duì)/親和色譜
分離基于與目標(biāo)樣品的專一的化學(xué)相互作用。更普遍的反相型用緩沖液和加入的對(duì)離子(與被分離的樣品荷相反電荷)分離。分離受pH、離子強(qiáng)度、溫度、濃度和共存的有機(jī)溶劑類型的影響。親和色譜，一般用于大分子,使用配合體(共價(jià)結(jié)合在固體基質(zhì)上的生物活性分子)，與其同類的抗原(分析介質(zhì))反應(yīng)，生成可逆轉(zhuǎn)的復(fù)合物,通過(guò)改變緩沖條件洗脫。
4. 正相色譜
正相色譜為用有機(jī)溶劑為流動(dòng)相和極性的固定相。此時(shí)較小極性的組分比較大極性組分更快地洗脫。
5. 反相色譜
反相色譜,一種鍵合相的色譜技術(shù)，用水作基本溶劑,選擇性也受溶劑強(qiáng)度、柱溫和pH的影響，一般來(lái)說(shuō)較大極性比較小極性組分洗脫更快。
6. 排阻色譜
也叫凝膠滲漉(permeation)或?yàn)V過(guò),分離基于化合物分子大小或水動(dòng)力學(xué)(hydrodynamic)容積。比多孔柱填料孔徑大得多的分子先洗脫，小分子進(jìn)入孔隙洗脫晚，其余的洗脫速率取決于其分子的相對(duì)大小。
二、 氣相色譜(GC)
氣相色譜基于揮發(fā)性樣品由作為流動(dòng)相的載氣運(yùn)載，通過(guò)色譜柱內(nèi)的固定相時(shí)發(fā)生吸附和解吸附過(guò)程進(jìn)行分離。
通常氣相色譜分析的樣品是低分子量化合物，這些化合物是易揮發(fā)的和高溫時(shí)穩(wěn)定的。在這一方面，藥物和藥物制劑中的殘留溶劑適于氣相色譜分析。生成化學(xué)衍生物可達(dá)到易揮發(fā)和熱穩(wěn)定的目的。
三、 薄層色譜(TLC)
薄層色譜是一種簡(jiǎn)便普通的色譜技術(shù)，分離基于在一端浸于溶劑混合物(流動(dòng)相)中的薄層板(固定相)上點(diǎn)的樣品移動(dòng)進(jìn)行分離，整個(gè)系統(tǒng)在密封的缸中進(jìn)行。
三種方法，氣相、液相和薄層中，薄層色譜是普通的試驗(yàn)方法，因?yàn)楸影迳纤械慕M分都可用適宜的檢測(cè)技術(shù)檢出。然而通常不如HPLC那么準(zhǔn)確和靈敏。雖然選用適宜的檢測(cè)技術(shù)，TLC法能見(jiàn)到分析的“全圖”(whole picture) ，但比HPLC分析變異較大。
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