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PCR技術(shù)的特點(diǎn)介紹
閱讀：7704 發(fā)布時(shí)間：2018-3-20
1、有一定程度單核苷酸錯(cuò)誤摻入
TaqDNA聚合酶缺少3’-5’核酸外切酶活性，因而不能糾正反應(yīng)中發(fā)生的核苷酸錯(cuò)誤摻人；與大腸桿菌聚合酶IKlenow片段相比較，用TaqDNA聚合酶的反應(yīng)錯(cuò)誤摻人相對(duì)多些。但在PCR擴(kuò)增過程中，其錯(cuò)配率一般只有約1／萬，足可以供特異性分析。
2、操作簡(jiǎn)便、快速
目前國(guó)內(nèi)外已有多種類型的PCR擴(kuò)增儀，只需把反應(yīng)材料按一定濃度混合，置于儀器內(nèi)，反應(yīng)便按所輸入的程序進(jìn)行。整個(gè)PCR操作過程，從標(biāo)本處理、PCR擴(kuò)增到產(chǎn)物分析，可在4h內(nèi)完成全部實(shí)驗(yàn)。擴(kuò)增產(chǎn)物可直接供作序列分析和分子克隆，擺脫繁瑣的基因分析方法；可直接從總RNA或DNA中或部分DNA已降解的樣品中分離目的基因，省去須先進(jìn)行克隆后再作序列分析的模式。已固定和包埋的組織或切片亦可用于檢測(cè)。
3、對(duì)起始材料質(zhì)量要求低
PCR技術(shù)對(duì)擴(kuò)增樣品的要求不高，僅含極微量目的DNA（pg、ng）、DNA粗制樣品或者總RNA，都可用做起始材料來獲得較多的目的產(chǎn)物。擴(kuò)增樣品既可以是純化的，也可以是粗制的；既可以是新鮮組織，也可以是陳舊樣品；既可以是細(xì)胞，也可以是體液；既可以是完整的大分子，也可以是部分降解的DNA。
4、可擴(kuò)增RNA或cDNA
先按通常方法用寡脫氧核苷酸引物和反轉(zhuǎn)錄酶將mRNA轉(zhuǎn)錄成主鏈cDNA，再將得到的單鏈cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。即使mRNA轉(zhuǎn)錄片段只有cDNA中的0．01％，也能經(jīng)PCR擴(kuò)增出10倍242bp對(duì)長(zhǎng)度的特異性片段。有些外顯子分散在一段很長(zhǎng)的DNA中，難于將整段DNA大分子擴(kuò)增和做序列分析。若以mRNA作為模板，則可將外顯子集中，用PCRl次便完成對(duì)外顯子的擴(kuò)增并進(jìn)行序列分析。
5、特異性強(qiáng)
自從提取出耐熱TaqDNA聚合酶以來，在熱變性處理時(shí)不被消化、不必在每次循環(huán)擴(kuò)增中再加入新酶，以及在較高溫度下連續(xù)反應(yīng)，顯著提高了PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性。PCR擴(kuò)增的特異性還依賴于兩個(gè)引物設(shè)計(jì)的好壞，依賴于引物與模板結(jié)合的正確性。PCR反應(yīng)時(shí)退火溫度對(duì)特異性也有影響，一般來說，退火溫度越高，擴(kuò)增的特異性越好。高溫啟動(dòng)法也可增加PCR擴(kuò)增的特異性，即通過在高溫（70℃）下加入某些必需因子（DNA聚合酶、模板DNA、Mg2+或引物等），使TaqDNA聚合酶僅在反應(yīng)達(dá)到較高溫度（>70℃）時(shí)才發(fā)揮作用。其他因素如酶濃度、dNTP、Mg2+、pH值等對(duì)PCR的特異性也有一定的影響。
6、敏感性高
PCR產(chǎn)物的生成以指數(shù)方式增加，能將極微量的靶DNA成百萬倍以上地?cái)U(kuò)增到足夠檢測(cè)分析量的DNA，它可對(duì)單拷貝基因、單個(gè)細(xì)胞、單根頭發(fā)、一滴血等微量標(biāo)本進(jìn)行分析。