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PCR基因擴(kuò)增儀對(duì)樣品的收集和擴(kuò)增環(huán)節(jié)操作要求
閱讀：2346 發(fā)布時(shí)間：2019-12-5
PCR基因擴(kuò)增儀是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。
PCR基因擴(kuò)增儀檢測(cè)微量感染因子時(shí)，操作人員容易因?yàn)槲廴径鴮?dǎo)致各種問題。SLD中檢實(shí)驗(yàn)室技術(shù)根據(jù)多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，給出的建議是：進(jìn)行PCR操作時(shí)，操作人員一定要嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程，大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染事故的發(fā)生。
盡管PCR擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)導(dǎo)致的，但樣品間的交叉污染也是常見原因之一。因此，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)要謹(jǐn)慎對(duì)待，在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)謹(jǐn)慎操作，一般需做到以下幾點(diǎn)：
1、戴一次性手套，若不小心濺上反應(yīng)液，應(yīng)立即更換手套;
2、避免反應(yīng)液飛濺，若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
3、使用一次性吸頭，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時(shí)間暴露于空氣中，避免空氣中氣溶膠的污染;
4、操作多份樣品時(shí)，制備反應(yīng)混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后再分裝，這樣既可以減少操作次數(shù)，避免污染，又可以增加反應(yīng)的精確度；
5、后加入反應(yīng)模板，加入后蓋緊反應(yīng)管;
6、操作時(shí)設(shè)立空白對(duì)照和陰陽性對(duì)照，既可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性，又可
以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性;
7、由于實(shí)際操作時(shí)加樣器很容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染，所以操作者應(yīng)該使用高壓處理過的或可替換的加樣器。假如沒有這種特殊的加樣器，至少在PCR操作過程中加樣器應(yīng)該，嚴(yán)禁交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)相鄰區(qū)域使用;
8、重復(fù)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果，慎下結(jié)論。
由于PCR實(shí)驗(yàn)操作非常專業(yè)，在設(shè)計(jì)PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室時(shí)設(shè)計(jì)師也要充分考慮上述技術(shù)要求，避免PCR實(shí)驗(yàn)室在后續(xù)使用時(shí)出現(xiàn)返工、返修問題。