在高效液相分析檢測(cè)樣品的過(guò)程中，色譜柱會(huì)受到來(lái)自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染，從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差、壽命縮短。

　　來(lái)自于色譜系統(tǒng)的污染主要指，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動(dòng)相系統(tǒng)過(guò)濾不*殘留的固體顆粒。來(lái)自于樣品的污染主要指，未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)中，由于樣品溶劑和流動(dòng)相溶劑對(duì)樣品溶解存在的溶解度差異，導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng)。特別是對(duì)于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測(cè)，因基質(zhì)的復(fù)雜性，色譜柱受污染的情況會(huì)更加嚴(yán)重。污染會(huì)導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等，從而帶來(lái)檢測(cè)成本高，測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確等各種影響。

　　圖：系統(tǒng)壓力升高或樣品基質(zhì)復(fù)雜導(dǎo)致分析柱污染

　　保護(hù)柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材，使用保護(hù)柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長(zhǎng)分析柱使用壽命。

　　保護(hù)柱位于進(jìn)樣器與分析柱之間，作用主要兩方面：

　　1.截留不溶性顆粒2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)

　　以下幾種情況建議使用保護(hù)柱：

　　1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重，梯度洗脫時(shí)影響更大。

　　2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染，保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染，從而延長(zhǎng)分析柱壽命。

　　保護(hù)柱很重要，但選擇合適的保護(hù)柱更重要，選擇或使用不當(dāng)也可能帶來(lái)截然相反的效果。

　　保護(hù)柱分類(lèi)及選擇：

　　從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK(聚醚醚酮)材質(zhì)

　　PEEK材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——樣品對(duì)金屬離子比較敏感時(shí)，選擇PEEK材質(zhì)比較合適，比如某些蛋白分析會(huì)用到PEEK材質(zhì)的分析柱，主要就是考慮到這方面的因素;

　　不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——大部分小分子化合物的分析，選擇不銹鋼材質(zhì)保護(hù)柱居多，特別是當(dāng)流動(dòng)相體系使用到DMSO等一些溶解性較強(qiáng)的溶劑時(shí)，必須選擇不銹鋼材質(zhì)，甚至對(duì)于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì)，因THF對(duì)于PEEK管路有相當(dāng)強(qiáng)的腐蝕作用。

　　從結(jié)構(gòu)上分：卡套式(柱芯+柱套)和直接填裝短柱

　　直接填裝短柱優(yōu)缺點(diǎn)——這種結(jié)構(gòu)的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱，一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣。生物樣品分析中，用這種類(lèi)型保護(hù)柱居多，除可過(guò)濾一些不溶顆粒外，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點(diǎn)是，一次性使用，污染嚴(yán)重時(shí)，只能報(bào)廢。

　　卡套式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——卡套式保護(hù)柱的柱套可反復(fù)使用，柱芯污染后可替換，廠家會(huì)提供配套的保護(hù)柱芯，但購(gòu)買(mǎi)時(shí)需要注意，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認(rèn)柱芯中的填料類(lèi)型再購(gòu)買(mǎi)。同時(shí)，柱芯和柱套需是來(lái)源于同一廠家的同一規(guī)格，否則，會(huì)存在匹配上的差異，導(dǎo)致峰型異常或者漏液。

　　從連接方式上分：獨(dú)立式和直連式

　　獨(dú)立式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護(hù)柱和分析柱之間用一段管路連接，不用擔(dān)心與分析柱在連接上的匹配問(wèn)題。但使用管路連接時(shí)，連接不當(dāng)容易產(chǎn)生死體積。

　　直連式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護(hù)柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接，死體積小，UPLC分析時(shí)建議選擇直連式保護(hù)柱;缺點(diǎn)：購(gòu)買(mǎi)時(shí)需保證接口與分析柱匹配。

　　保護(hù)柱選擇考慮以下幾方面因素：

　　1.除非特殊情況，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)*相同的保護(hù)柱。

　　2.選擇保護(hù)柱尺寸可按柱體積計(jì)算，保護(hù)柱體積按分析柱體積的5%~10%即可;如4.6*250mm的分析柱體積約為4mL，保護(hù)柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜。同時(shí)，保護(hù)柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當(dāng)。