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西安東瑞科教實(shí)驗(yàn)儀器有限公司
主營產(chǎn)品： 流量型蠕動(dòng)泵,智能氫氣發(fā)生器,肉類安全檢測儀,肉類食品安全綜合分析儀,雞蛋新鮮度快速檢測盒 |
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2011-4-8 閱讀(2842)
| 提 供 商 | 西安東瑞科教實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 | 資料大小 | 0K |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 1次 | |
| 資料類型 | 未傳 | 瀏覽次數(shù) | 2842次 |
| 紫外光/可見光分光光度計(jì)基本裝置中采用高強(qiáng)度的鎢燈作為光源，能夠在可見光范圍（400~700nm）調(diào)節(jié)。氘燈用于紫外分光光度測量（200~400nm）；使用氘燈時(shí)要用石英杯，因?yàn)樽贤饩€不能透過玻璃。 分光光度計(jì)之所以優(yōu)于比色計(jì)就在于使用了一個(gè)衍射光柵將光源的復(fù)色光轉(zhuǎn)換為單色平行光束。實(shí)際上從這種單色一種產(chǎn)生的光不是某個(gè)波長的光，而是一段窄的帶寬上的光，帶寬是分光光度計(jì)的一個(gè)重要特性，這是由于它決定了吸收測量中所用的波長——普通分光光度計(jì)的帶寬為5~10nm，用于研究的儀器的帶寬小于1nm。 因?yàn)楣鈻艎A縫的寬度影響著帶寬，帶寬隨光柵夾縫的寬度的減少而降低，要獲得特定波長下的數(shù)據(jù)，盡可能使用zui小的縫寬度。然而，減少了縫寬也會(huì)減少到達(dá)監(jiān)測器的光度，降低了信/噪比。縫寬可減少的程度取決于檢測/放大系統(tǒng)的靈敏度及穩(wěn)定性于離散光的存在。 大多數(shù)UV/可見光分光光度計(jì)使用的比色杯的光穿過路徑為10nm。一次性塑料杯適合于對(duì)水和乙醇溶液在可見光范圍內(nèi)的測量。玻璃比色杯的生產(chǎn)要求更加嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，因而在研究中要使用玻璃比色杯，尤其當(dāng)溶液的吸收值很低時(shí)（<0.1），即使盛對(duì)照液與待測樣品液的比色杯在光學(xué)性質(zhì)上有稍許不同，也會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏差。玻璃和塑料會(huì)吸收UV光，因此在測波長小于300nm的吸收值時(shí)要使用石英杯。 進(jìn)行測量之前，比色杯要保證干凈，無劃痕，外表面干燥，盛液到適當(dāng)高度，并放在了比色槽中的正確位置。生物樣品中蛋白質(zhì)和核酸可能會(huì)在玻璃/石英杯的內(nèi)表面沉積，因而要用棉球沾上丙酮擦去比色杯內(nèi)的沉淀或用1mol/L硝酸浸泡過夜。腐蝕性及毒性溶液必須使用有蓋子的比色杯，以防止濺出，破壞儀器。 基本分光光度計(jì)使用的光電管類似于比色計(jì)中所使用的光電管。許多情況下，當(dāng)波長高于和低于550~600nm時(shí)必須使用不同的光電管，這是因?yàn)樗鼈冊(cè)诳梢姽獠ㄩL內(nèi)的靈敏度不同，更精彩的儀器中所使用的是具有比光電管更高的靈敏度和穩(wěn)定性的檢測器。數(shù)字顯示由于不易產(chǎn)生視覺錯(cuò)誤和誤讀范圍的錯(cuò)誤，正逐漸代替指針讀數(shù)。一些儀器可以直接給出所測定物質(zhì)的濃度。 1．紫外光/可見光分光光度計(jì)的類型： 基本分光光度計(jì)只產(chǎn)生單束光。這種儀器首先用空白對(duì)照調(diào)到零吸收值，然后取出空白液，加入待測液，測定待測液的吸收值。也有一種雙束分光光度計(jì)，有單色光源產(chǎn)生的光束被分為兩束，一束穿過待測液，另一束穿過空白液。吸收值由一個(gè)電子線路通過對(duì)比透過待測液及空白液的出射光進(jìn)行測定。雙光束分光光度計(jì)減少了由于光源輸出的不穩(wěn)定或檢測系統(tǒng)靈敏度的變化而導(dǎo)致的測量錯(cuò)誤，這時(shí)由于待測液與對(duì)照液是同時(shí)進(jìn)行測量的。記錄式分光光度計(jì)是一種雙束測定儀，用于記錄已知波段下吸收值隨時(shí)間的變化（如用于酶分析）。 2．分光光度計(jì)的定量分析： 假如已知一種物質(zhì)在某一波長下的吸光率（通常是該物質(zhì)的zui大吸收值，這時(shí)靈敏度zui高），這種物質(zhì)純?nèi)芤旱臐舛瓤捎帽葼枺什P(guān)系式算出。摩爾吸光系數(shù)是指物質(zhì)在1mol/L的濃度下，比色杯厚度為1cm時(shí)的吸收值。該值可以從光譜數(shù)據(jù)表中查到，也可以用實(shí)驗(yàn)方法通過測量一系列已知濃度的物質(zhì)的吸收值來繪制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。這樣，在所要求的濃度范圍內(nèi)，便可確定吸收值與濃度之間存在的線性關(guān)系，該直線的斜率即為摩爾吸光系數(shù)。 比吸光率是指物質(zhì)質(zhì)量溶液濃度為10g/L時(shí)，比色杯厚度為1cm時(shí)測定的吸光值。該值對(duì)于未知分子質(zhì)量的物質(zhì)如蛋白質(zhì)核酸的測定很有用，這種情況下溶液中物質(zhì)的含量以其質(zhì)量表示而不用摩爾濃度表示。使用公式Log10（Io/I）=εl[C]時(shí)，比吸光率要除以10才可以得到一個(gè)以g/L為單位的濃度值。 這種簡單的方法不能用于測定混合樣品。在這種情況下，也許可以通過測量幾個(gè)波長下的吸光度來估算每種成分的含量，如可用此方法在核酸存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的估算。 |
