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蛋白酶抑制劑技術(shù)原理和選擇指南2
點(diǎn)擊次數(shù)：2562 發(fā)布時(shí)間：2014-5-6
當(dāng)細(xì)胞破碎的時(shí)候，蛋白水解酶就會(huì)被釋放出來(lái)或被激活，使電泳結(jié)果復(fù)雜化，影響zui終結(jié)果分析。為了避免這些情況的出現(xiàn)，建議在樣品制備時(shí)盡可能在低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時(shí)應(yīng)當(dāng)使用蛋白酶抑制劑。因此對(duì)于我們想要研究的蛋白來(lái)說(shuō)，選擇性和有效的抑制這些蛋白酶對(duì)于蛋白純化路線設(shè)計(jì)來(lái)說(shuō)顯得尤為重要。
蛋白酶抑制劑與蛋白酶一樣，都是紛繁復(fù)雜的，通常使用許多化學(xué)物質(zhì)作為蛋白酶抑制劑，如PMSF和leupeptin。而且由于一種蛋白酶抑制劑只對(duì)某一類蛋白酶起作用，因此通常建議復(fù)合使用蛋白酶抑制劑，如廣譜蛋白酶抑制劑“雞尾酒”，見(jiàn)下表（來(lái)自《蛋白質(zhì)電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù)》）。
| 蛋白酶抑制劑 | 有效抑制的酶 |
| PMSF(Pheylmethylsulfonyl fluoride)是很常見(jiàn)的抑制劑，使用濃度為1mmol/L | 不可逆抑制絲氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶。 |
| AEBSF 絲氨酸抑制劑，使用濃度為4mmol/L | AEBSF的抑制活性與PMSF相近，但它更易溶于水而且毒性低 |
| EDTA，EGTA，使用濃度為1mmol/L | 通過(guò)鰲合蛋白酶維持活性所必需的金屬離子來(lái)抑制金屬蛋白酶。 |
| 多肽蛋白酶抑制劑，使用濃度為2-20ug/ml | 亮肽素（Leupeptin）能抑制多種絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶；抑肽素（pepstatin）抑制天冬氨酸蛋白酶；抑肽酶（aprotinin）能抑制許多絲氨酸蛋白酶；苯丁抑制劑（bestatin）能抑制氨基酸多肽酶 |
| TLCk，TPCK，使用濃度為0.1-0.5mmol/L | 不可逆的抑制絲氨酸和半胱氨酸的蛋白酶 |
| 芐脒（Benzamidine）使用濃度為1-3mmol/L | 抑制絲氨酸蛋白酶 |
蛋白酶抑制劑的功能和分類
蛋白酶功能 :
涉及到許多細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的過(guò)程:
1 食物蛋白在消化道的消化
2 激活無(wú)活性酶原和多肽激素/神經(jīng)轉(zhuǎn)移介質(zhì)的釋放
3 調(diào)節(jié)血凝物質(zhì)和纖維素
4 內(nèi)源性和外源性蛋白的細(xì)胞內(nèi)消化
5 跨膜的蛋白轉(zhuǎn)移
6 微生物對(duì)生物體攻擊,通過(guò)釋放蛋白酶的導(dǎo)致毒性增加
蛋白酶分類 :
根據(jù)催化中心結(jié)構(gòu)的不同蛋白酶可分為4類 :
1. 絲氨酸蛋白酶在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸，如: 糜蛋白酶,彈性蛋白酶，血纖維蛋白溶酶，凝血酶，枯草桿菌蛋白酶，胰酶Chymotrypsin, Elastase, Plasmin, Subtilisin,Thrombin, Trypsin
2. 半胱氨酸蛋白酶（別名 :硫醇或SH 蛋白酶）在其催化中心含有半胱氨酸，如 : Calpain, 組織蛋白酶 B,C 和L，和木瓜蛋白酶
3 天(門(mén))冬氨酸蛋白酶 （羧基蛋白酶）在其活化中心含有天(門(mén))冬氨酸， 如 : 組織蛋白酶D, 木瓜蛋白酶, 腎素
4. 金屬蛋白酶含有金屬離子， 即 : 鋅2+在其催化中心，如氨基肽酶，羧基蛋白酶A 和 B，嗜熱菌蛋白酶
在分離蛋白時(shí)，組織或細(xì)胞裂解液中充滿了來(lái)自溶酶體的酶,并且原來(lái)無(wú)活性的蛋白酶原被充分激火,開(kāi)始消化其周圍的蛋白質(zhì).為避免此因素，蛋白酶抑制劑必須被加入在緩沖液內(nèi)以阻止蛋白酶對(duì)細(xì)胞組織的消化作用. 來(lái)自哺乳類動(dòng)物，植物, 霉菌或細(xì)菌的組織，蛋白酶成分是不同的,并根據(jù)機(jī)體狀態(tài)的發(fā)展蛋白酶也可以發(fā)生變化. 哺乳類動(dòng)物組織分離時(shí)比細(xì)菌或其它組織分離時(shí)更需要應(yīng)用蛋白酶抑制劑使組織細(xì)胞受到*的保護(hù).
因此，在各種蛋白分離時(shí)，在各種蛋白電泳時(shí)蛋白酶抑制劑的適當(dāng)選用就成了很重要的因素。
羅氏蛋白酶抑制劑&磷酸酶抑制劑
cOmplete 是多種蛋白酶抑制劑的混合片劑：為水溶性片劑；同時(shí)持續(xù)抑制絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶及金屬蛋白酶等在內(nèi)的多種蛋白酶；可用于所有的組織及細(xì)胞，如動(dòng)物、植物、酵母、細(xì)菌或真菌。
PhosSTOP保護(hù)蛋白質(zhì)不發(fā)生去磷酸化反應(yīng)；可以抑制多種磷酸（酯）酶；適用于在細(xì)胞裂解過(guò)程中保護(hù)蛋白質(zhì)，并且可以適用于多種不同來(lái)源的樣品（哺乳動(dòng)物，植物，酵母）；可以結(jié)合cOmpleysis Kits 和 cOmplete Protease Inhibitor CocktailTablets一起使用；這種抑制劑藥片可用于緩沖福爾馬林（福爾馬林固定術(shù)）。
| 4906845001 | PhosStop, 10 tablets ,EASYpack | 10 tablets （each tablet for 10 ml） |
| 4906837001 | PhosStop, 20 tablets ,EASYpack | 20 tablets （each tablet for 10 ml） |
| 11836153001 | Complete Mini, 25 tablets | 25 tablets （for 10ml each） |
| 11836170001 | Complete Mini, EDTA-free, 25 tablets | 25 tablets （for10ml each） |
| 11697498001 | Complete, 20 tablets | 20 tablets （for 50ml each） |
| 11836145001 | Complete, 3 x 20 tablets | 3 x 20 tablets （for 50ml each） |
| 11873580001 | Complete, EDTA-free, 20 tablet | 20 tablets （for 50ml each） |
| 4693116001 | cOmplete,20 tablets,EASYpack | 20 tablets （in foil blistersfor 50ml each） |
| 4693132001 | cOmplete,EDTA-free,20 tablets,EASYpack | 20 tablets （in foil blistersfor 50ml each） |
| 4693124001 | cOmplete,Mini,30 tablets, EASYpack | 30 tablets （in foil blisters for 10ml each） |
| 4693159001 | cOmplete,Mini,EDTA-free,30 tablets ,EASYpack | 30 tablets （in foil blisters for 10ml each） |