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1、使用前認(rèn)真閱讀色譜柱的說明書，了解色譜柱的種類，選用合適的色譜柱。

在選用色譜柱時，應(yīng)充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數(shù)量、結(jié)構(gòu)特征。根據(jù)化合物的性質(zhì)，選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同，使用錯誤的流動相會降低柱效，損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分，應(yīng)當(dāng)采用親水性的反相填料。對于首次使用的色譜柱，還應(yīng)按照廠家的出廠說明對色譜柱進(jìn)行低流速的沖洗活化，活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強(qiáng)，柱效提高，壽命延長。

 

2、樣品的準(zhǔn)備與預(yù)處理

我們的經(jīng)驗是樣品純化得越干凈，色譜柱的使用壽命越長。許多樣品，尤其是生物樣品，組份非常復(fù)雜，對色譜柱的損傷性較大，不經(jīng)預(yù)處理的樣品直接分析，會嚴(yán)重縮短色譜柱的使用壽命。因此，在樣品的準(zhǔn)備時需對樣品進(jìn)行預(yù)處理，包括準(zhǔn)備溶劑的選擇、樣品過濾等。

 

2.1 制樣溶劑的選擇

制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性，而且與流動相溶，洗脫強(qiáng)度最好低于流動相或梯度洗脫中的起始流動相，以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品，這些溶劑會破壞固定相的結(jié)構(gòu)，從而縮短色譜柱的使用壽命。此外，制樣溶劑還應(yīng)與色譜系統(tǒng)其他部件如高壓泵、進(jìn)樣器等相適用。

 

2.2 制樣溶劑過濾

在進(jìn)樣前需過濾樣品溶液，如采用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒，以免堵塞柱頭濾片及柱內(nèi)填充床。在條件允許的情況下，最好采用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過濾進(jìn)樣溶液，可以減少在色譜柱上死吸附的物質(zhì)或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類易于沉淀死吸附在C18反相色譜柱中，導(dǎo)致柱效降低、柱壓升高。采用SPE柱過濾后，可以有效減少在色譜柱中附著沉積的死吸附成分，保護(hù)色譜柱不被污染，保證其使用壽命。

 

 

2.3 其他，如溶液濃度、進(jìn)樣量等

分析物的某些性質(zhì)同樣能影響色譜柱的使用壽命。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿性物質(zhì)和蛋白質(zhì)類生物大分子，它們能與固定相填料作用，或生成不可逆吸附層，改變填料表面特征，使色譜柱性能發(fā)生變化，最終導(dǎo)致分離失效。此外樣品的進(jìn)樣量過大、超載都會影響色譜柱的分離性能和使用壽命。