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摘要：采用凱氏法測辣木葉提取物中的蛋白質(zhì)含量是國標(biāo)推薦方法。

關(guān)鍵詞：沛歐全自動定氮儀、消化爐、辣木葉蛋白質(zhì)含量

引言：辣木葉為辣木科辣木屬植物的樹葉，可食用，其營養(yǎng)價值非常豐富，含有大量的蛋白質(zhì)、氨基酸、纖維素及礦物質(zhì)，具有降血糖、降脂、降壓、抗腫瘤、抗氧化、通便、改善睡眠等功效，長期食用可增強人體**功能，延緩衰老、預(yù)防**，其蛋白質(zhì)的含量直接影響辣木葉的品質(zhì)和營養(yǎng)功效，因此對辣木葉提取物蛋白質(zhì)含量的測定具有重要的意義。為此我們使用沛歐全自動定氮儀SKD-1000（采用通用的顏色法判斷、具有多項磚利技術(shù)）紅外石英消化爐SKD-20S2對辣木葉提取物進行蛋白質(zhì)檢測。

前言:按GB2009.5食品安國內(nèi)家標(biāo)準(zhǔn) 《食品中蛋白質(zhì)的測定》**法要求測試。

參考文獻：GB2009.5

一、原理

辣木葉提取物樣品在濃硫酸和硫酸銅、硫酸鉀高溫下，把有機的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，把氮元素氧化成硫酸銨，（為了使得樣品消化時不產(chǎn)生掛壁，必須采用樣品孔間溫差小和帶程序升溫功能的消化爐，否則會產(chǎn)生掛壁現(xiàn)象，導(dǎo)致消化失敗）消化完成后，需要將樣品冷卻到40℃左右，再把消化管放入定氮儀上。消化管內(nèi)自動添加稀釋液、堿，反應(yīng)杯內(nèi)自動添加硼酸和顯色劑。對消化管內(nèi)樣品加熱逸出氨氣和水蒸氣混合液，冷卻流到反應(yīng)杯內(nèi)，同時用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸進行滴定，直到蒸餾結(jié)束和滴定到終點。計量消耗標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的體積即可計算辣木葉提取物中蛋白質(zhì)含量。

二、儀器和設(shè)備

1. 全自動定氮儀SKD-1000（上海沛歐分析儀器有限公司）

2. 消化爐SKD-20S2（上海沛歐分析儀器有限公司）

3. 萬分之**平

4. 滴管移液器

5.烘箱

三、試劑、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

1. 標(biāo)準(zhǔn)鹽酸濃度：0.1114 mol/L

2. 40%的氫氧化鈉

3.2%的硼酸+甲基紅和嗅甲酚綠混合的顯色劑（1:3.5）

4.催化劑（硫酸銅:硫酸鉀為1:10的混合物）

5.蒸餾水

6.樣品：辣木葉提取物20201001

7.硫酸銨 

四、操作條件和程序

1. 樣品制備

用分析天平依次稱取2個空白，稱樣量為：①0.4082 g硫酸銅、3.6037 g硫酸鉀；②0.4045 g硫酸銅、3.6049 g硫酸鉀，5個辣木葉提取物待測樣品，稱樣量為：①0.4061 g硫酸銅、3.6010 g硫酸鉀、0.4058 g辣木葉提取物；②0.4048 g硫酸銅、3.6035 g硫酸鉀、0.4037 g辣木葉提取物；③0.4097 g硫酸銅、3.6060 g硫酸鉀、0.4032 g辣木葉提取物；④0.4069 g硫酸銅、3.6018 g硫酸鉀、0.4096 g辣木葉提取物；⑤0.4047 g硫酸銅、3.6009 g硫酸鉀、0.4011 g辣木葉提取物，將稱量好的空白與樣品分別置于標(biāo)號的消化管中，依次向每個消化管中加入10 mL硫酸。

2. 樣品消化及消化爐參數(shù)設(shè)置

將制備好的空白及樣品按序號放入消化爐，蓋上排廢氣裝置，打開抽氣泵上水開關(guān)（前三個階段水流要大，使釋放出大量廢氣能及時排除，第四階段水流開小以避免酸霧排出），然后進行消化爐溫度-時間曲線參數(shù)設(shè)置：135度（20分鐘）--190度（25分鐘）---350度（5分鐘）----400度（70分鐘），消化爐根據(jù)時間-溫度曲線自動升溫和保溫，直到消化結(jié)束。把消化架取下放在冷卻架上，冷卻到40℃左右。

3.凱氏定氮儀儀器回收率測定

用分析天平精密稱量已烘干的硫酸銨（125 ℃烘箱烘2h）2份，稱樣量為：0.1041 g、0.115 g，分別置于標(biāo)號的消化管中，然后在凱氏定氮儀儀器上進行測定參數(shù)設(shè)置進行測定，參數(shù)設(shè)置為：堿10 mL、稀釋液20 mL、樣品0.1041g和0.115g、滴定酸為鹽酸、標(biāo)準(zhǔn)酸濃度為0.1114 mol/L、定時6 min、系數(shù)1、名稱硫酸銨1和硫酸銨2，參數(shù)設(shè)置完畢后，點擊屏幕上的測試程序中的調(diào)取，*后點擊樣品測試選項即可進行測試，測試完畢后查看兩次平行測定的含氮和消耗酸的數(shù)據(jù)是否正常，依次來判定該儀器運行是否正常。

4.凱氏定氮儀參數(shù)設(shè)置

  打開凱氏定氮儀顯示屏，點擊參數(shù)設(shè)置，依次輸入堿45 mL、稀釋液40mL、樣品克數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)酸濃度0.11414 mol/L、定時6 min、樣品名稱、系數(shù)6.25，總共測5個樣品，因此要依次設(shè)置5次，一并保存，即可自動測定。

5.樣品蛋白質(zhì)測定

  參數(shù)設(shè)置完后，便可將對應(yīng)標(biāo)號的空白和樣品的消化管接到儀器對應(yīng)位置，先測空白，再依次測樣，測定數(shù)據(jù)依次自動保存在儀器硬件盤中，測完查詢記錄即可。

6.計算公式

蛋白質(zhì)含量計算公式x%=6.38×1.401(v-v0)c/m

氮含量計算公式y%=1.401(v-v0)c/m

x%---------蛋白質(zhì)含量

y%---------氮含量

v--------消耗標(biāo)準(zhǔn)酸體積（ml)

V0------空白消化標(biāo)準(zhǔn)酸體積(ml)

C--------標(biāo)準(zhǔn)酸濃度（mol/L)

m--------樣品質(zhì)量(ｇ)

質(zhì)控品采用烘干的分析純（99%）硫酸氨，硫酸銨理論含氮量21.21%

結(jié)果分析:本次測試數(shù)據(jù)符合要求，數(shù)據(jù)可靠。

附：5009.5-2010 《食品安國內(nèi)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定》

注意事項：

辣木葉提取物在取樣時注意均勻性，在消化樣品時，尤其是含糖、油脂的樣品容易起泡產(chǎn)生樣品掛壁，這時消化爐要有程序升溫功能，孔間溫差要小，避免樣品溫差所產(chǎn)生的升溫不協(xié)調(diào)而使樣品掛壁。

定氮儀要有足夠大的蒸餾功率，以便盡可能蒸餾出氨氣，提升回收率。如果全自動定氮儀則采用顏色法終點判斷的方法，保障數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和儀器的線性度。

儀器安裝現(xiàn)場圖