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超聲波細(xì)胞粉碎儀破碎細(xì)胞問題匯總

閱讀:2829          發(fā)布時(shí)間:2012-4-1

超聲波細(xì)胞粉碎儀破碎細(xì)胞問題匯總
   大腸桿菌表達(dá)外源蛋白,在超聲破碎的時(shí)候,用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,然后超聲的效果較好,1%triton-X-100的作用還是很明顯的,對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用,比如鏈霉菌。
   細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer,再加5ul的巰基乙醇,混勻,離心,煮沸10min,直接上樣,染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min 就可以.

    在表達(dá)重組蛋白后超聲波細(xì)胞粉碎儀破碎細(xì)胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫,影響了破碎功率,pbs和tris緩沖液都是這樣,zui后都是破碎不*,而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。

  1、會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒放好。探頭一定要接近底部,約1cm(我一般是距底部0.5mm)。功率根據(jù)超聲波細(xì)胞粉碎儀不同會(huì)有所不同,但你可以觀察液面,有波動(dòng)但不要太劇烈就好。

  2、破3S停10S,破個(gè)二三十次看看。 
  3、超聲波細(xì)胞粉碎儀變幅桿位置擺放也要注意,聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。 在破碎時(shí)試著加大體積,強(qiáng)度不要超過60%. 

  4、嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說,你的方法很難散熱,導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,停頓時(shí)間稍長(zhǎng)一些,這種情況多見于包涵體形式的蛋白。

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