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北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

紅曲米粉中桔青霉素的測定—HPLC法解決方案

時間:2016-9-9 閱讀:4946
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紅曲米粉是指以大米為原料,用紅曲菌屬(Monascus spp)紅曲霉發(fā)酵培養(yǎng)制得,具有紅色的顆?;蛴闷渲瞥傻姆勰D壳凹t曲可分為色曲、酒曲和功能性紅曲。在紅曲霉的發(fā)酵過程中,同時與紅曲色素相伴產(chǎn)生一種有害的次級代謝產(chǎn)物--桔青霉素。研究表明桔青霉素具有腎毒性,可致畸、致癌和誘發(fā)基因突變。桔青霉素的存在,制約了紅曲在食品及藥品方面的廣泛應用,在一定程度上阻礙了紅曲產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

目前紅曲米粉中桔青霉素檢測難點是凈化效果差,影響目標物的定性與定量。

方法優(yōu)勢:

迪馬科技依照國標《QB/T 2847-2007 功能性紅曲米(粉)》中樣品預處理方法及HPLC條件,配合使用固相萃取柱進行凈化,建立了紅曲米粉中桔青霉素的測定方法,該方法:

  1. 采用95%甲醇水超聲提取,濃縮經(jīng)混合型強陰離子交換柱凈化,運用HPLC-FLD測定;

  2. 本方法定量限是10 μg/kg,回收率達90%以上,保證實驗結果的準確性、重現(xiàn)性;

  3. 本方案具有前處理簡單,回收率高,除雜效果明顯、方法重現(xiàn)性好等優(yōu)點;

  4. 適用于各省市出入境、質檢、疾控、食品藥品檢驗所、第三方檢測機構、食品檢測機構、大型食品生產(chǎn)商、高校和科研院所等。

以下為詳細解決方案,敬請參考!

紅曲米粉中桔青霉素的測定—HPLC法

1、適用范圍

本方案適用于紅曲米粉中桔青霉素的檢測,方法定量限是10 μg/kg。

2、提取

  1. 1.0 g樣品,加入10 mL 95%甲醇水溶液,混勻,超聲10 min,間隔振蕩,6000 rpm離心2 min,取上清液;

  2. 向下層殘渣中加入8 mL 95%甲醇水溶液,混勻,超聲10 min,間隔振蕩,6000 rpm離心2 min,合并上清液;

  3. 將上清液在35 ℃水浴下減壓蒸餾至剩水,加入2 mL甲醇,超聲溶解,6000 rpm離心1 min,取上清液,待凈化。

3、凈化——ProElut PXA 60 mg/3 mL(Cat#:68303)

a活    化:

加入3 mL甲醇活化;

b上    樣:

加入待凈化液,棄去流出液;

c淋    洗:

加入3 mL 5%甲酸甲醇溶液,棄去流出液;

d洗    脫:

加入2 mL 0.2 M鹽酸甲醇溶液,收集流出液,供HPLC分析。

4、色譜條件

色譜柱:Platisil ODS,150 x 4.6 mm,5 μm(Cat#:99501)

流  速:1.0 mL/min    進樣量:20 μL   柱  溫:28 ℃

檢測器:FLD,Ex:331 nm;Em:500 nm

流動相:A:1% 磷酸水溶液    B:乙腈     A:B=57:43

5、添加回收結果

紅曲米粉中桔青霉素的HPLC檢測添加回收結果

樣品

添加水平(mg/kg)

回收率(%)

紅曲米粉

0.05

97.53

0.20

97.23

桔青霉素標準品(0.025 mg L)液相色譜圖.jpg

桔青霉素標準品(0.025 mg/L)液相色譜圖

桔青霉素標準品(0.1 mg L)液相色譜圖.jpg

 

桔青霉素標準品(0.1 mg/L)液相色譜圖

添加水平為0.05 mg/kg紅曲米粉中桔青霉素檢測液相色譜圖

添加水平為0.20 mg/kg紅曲米粉中桔青霉素檢測液相色譜圖

紅曲米粉中桔青霉素檢測(空白樣品)的液相色譜圖

 

紅曲米粉中桔青霉素的測定—HPLC法相關產(chǎn)品信息:

貨號

名稱

規(guī)格

樣品前處理

68303

ProElut PXA

60 mg/3 mL, 50/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

12位

4803

1,3,6mL柱管通用連接器

15/pk

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正壓兩用泵,無油

1/pk

99013

抽濾瓶套裝

(包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)

1/pk

30039

FitMax針頭式過濾器 Nylon

13 mm,0.22 μm 100/pk

30040

FitMax針頭式過濾器 Nylon

13 mm,0.45 μm 100/pk

標準品

50D-22958-5MG

桔青霉素[518-75-2]

5   mg

色譜柱及保護柱

99501

Platisil ODS 寬pH范圍型反相色譜柱

150 x 4.6 mm,5 μm

HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑

50144

甲酸  HPLC級

50 mL

50101

乙腈  HPLC級

4 L

50102

甲醇  HPLC級

4 L

50133

磷酸  HPLC級

50   mL

通用色譜產(chǎn)品

52401B

瓶架/藍色(現(xiàn)貨)

50孔

52401A

瓶架/白色(現(xiàn)貨)

50孔

1034

樣品瓶(棕色/螺紋)

2 mL, 100/pk

1035

樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝)

100/pk

H80465

HPLC 進樣針

25 μL

紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*

 

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