13
當(dāng)前位置：北京迪科馬科技有限公司（迪馬科技）>>技術(shù)文章>>迪馬科技水中抗生素檢測解決方案
迪馬科技水中抗生素檢測解決方案
據(jù)*，全國主要河流，黃浦江、長江入海口、珠江等都被檢出了抗生素。其中，珠江廣州段受抗生素污染非常嚴(yán)重，脫水紅霉素、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶的含量分別為460納克/升、209納克/升和184納克/升，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出了歐美發(fā)達(dá)國家河流中100納克/升以下的含量。此外，南京、安慶、銅陵、阜陽、蚌埠等部分地區(qū)的居民自來水中也被檢出抗生素。
據(jù)專家解釋，目前，國家對自來水內(nèi)的抗生素含量并無專業(yè)手段進(jìn)行檢測，現(xiàn)行國家頒布的生活飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)106項指標(biāo)中也無抗生素指標(biāo)檢測標(biāo)準(zhǔn)，該項指標(biāo)的檢測較為困難。
迪馬科技一直致力于為水質(zhì)檢測工作保駕護(hù)航，對于地表水及生活飲用水檢測可提供全面詳盡的解決方案。對于水中抗生素的檢測，迪馬科技推出多種抗生素檢測方案，詳細(xì)信息如下：
一、 水中磺胺類藥物的檢測（SPE-HPLC方法）
二、 水中氯霉素的檢測（SPE-HPLC方法）
三、 水中喹諾酮類藥物的檢測（SPE-HPLC方法）
四、 水中氯霉素、磺胺類、四環(huán)素類、脫水紅霉素以及喹諾酮類等14種抗生素的測定（SPE-UHPLC/MS/MS方法）
水中磺胺類藥物的檢測
1、適用范圍
本方案適用于水中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲嘧啶和磺胺甲氧噠嗪的檢測，方法檢出限是0.5 μg /L。
2、提取
(1) 水樣以0.45 μm濾膜除去懸浮物。
(2) 取200 mL水樣和100 mL Mcllvaine緩沖液*，混勻，準(zhǔn)備凈化。
*Mcllvaine緩沖液(pH 4.0)：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6 g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9 g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2 g,用水溶解后稀釋并定容至1000 mL。
3、凈化——ProElut PLS 150 mg/6 mL（Cat.# 68004）
| a活 化： | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液棄去； |
| b上 樣： | 加入待凈化液，流出液棄去； |
| c淋 洗： | 加入10 mL 水，流出液棄去，推干小柱； |
| d洗 脫： | 加入5 mL甲醇，收集流出液； |
| e重新溶解： | 將流出液在35 ℃下減壓蒸至近干，用流動相定容至1 mL，供HPLC分析。 |
4、色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18(2), 250 mm × 4.6 mm, 5 μm（Cat.# 99603）
流 速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20 μL
柱 溫：35 ℃
檢測器：UV 270 nm
流動相： A：乙腈， B： 2%乙酸水溶液
梯度程序
| t/min | 0 | 17 | 18 | 25 |
| A/% | 12 | 19 | 12 | 12 |
| B/% | 88 | 81 | 88 | 88 |
5、添加回收結(jié)果
水樣中磺胺類藥物的HPLC檢測添加回收結(jié)果
| 化合物 | 添加水平(μg/L) | 回收率(%) |
| 磺胺嘧啶 | 2.0 | 87.46 |
| 磺胺吡啶 | 2.0 | 80.42 |
| 磺胺甲基嘧啶 | 2.0 | 80.03 |
| 磺胺二甲基嘧啶 | 2.0 | 70.52 |
| 磺胺甲氧噠嗪 | 2.0 | 75.70 |
水中氯霉素的檢測
1、適用范圍
本方案適用于水中氯霉素的檢測，方法檢出限是1.0 μg /L。
2、提取
(1) 水樣以0.45 μm濾膜除去懸浮物。
(2) 取200 mL水樣和100 mL Mcllvaine緩沖液*，混勻，準(zhǔn)備凈化。
*Mcllvaine緩沖液(pH 4.0)：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6 g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9 g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2 g,用水溶解后稀釋并定容至1000 mL。
3、凈化——ProElut PLS 150 mg/6 mL（Cat.# 68004）
| a活 化： | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液棄去； |
| b上 樣： | 加入待凈化液，流出液棄去； |
| c淋 洗： | 加入10 mL 水，流出液棄去，推干小柱； |
| d洗 脫： | 加入5 mL甲醇，收集流出液； |
| e重新溶解： | 將流出液在35 ℃下減壓蒸至近干，用流動相定容至1 mL，供HPLC分析。 |
4、色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18(2), 250 mm × 4.6 mm, 5 μm（Cat.# 99603）
流 速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20 μL
柱 溫：30 ℃
檢測器：UV 280 nm
流動相：甲醇：水=40：60
5、添加回收結(jié)果
水樣中氯霉素的HPLC檢測添加回收結(jié)果
| 化合物 | 添加水平(μg/L) | 回收率(%) |
| 氯霉素 | 2.5 | 91.43 |
水中喹諾酮類藥物的測定
1、適用范圍
本方案適用于水中馬波沙星、恩諾沙星、雙氟沙星和沙拉沙星的檢測，方法檢出限是0.5 μg /L。
2、提取
(1) 水樣以0.45 μm濾膜除去懸浮物。
(2) 取200 mL水樣和100 mL Mcllvaine緩沖液*，混勻，準(zhǔn)備凈化。
*Mcllvaine緩沖液(pH 4.0)：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6 g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9 g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2 g,用水溶解后稀釋并定容至1000 mL。
3、凈化——ProElut PLS 150 mg/6 mL（Cat.# 68004）
| a活 化： | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液棄去； |
| b上 樣： | 加入待凈化液，流出液棄去； |
| c淋 洗： | 加入10 mL 水，流出液棄去，推干小柱； |
| d洗 脫： | 加入5 mL甲醇，收集流出液； |
| e重新溶解： | 將流出液在35 ℃下減壓蒸至近干，用流動相定容至1 mL，供HPLC分析。 |
4、色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18(2), 250 mm × 4.6 mm, 5 μm（Cat.# 99603）
流 速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20 μL
柱 溫：35 ℃
檢測器：UV 300 nm
流動相：A．0.2%磷酸水溶液，B．甲醇； A：B=70：30
5、添加回收結(jié)果
水樣中喹諾酮類藥物的HPLC檢測添加回收結(jié)果
| 化合物 | 添加水平(μg/L) | 回收率(%) |
| 馬波沙星 | 5.0 | 86.80 |
| 恩諾沙星 | 5.0 | 86.73 |
| 雙氟沙星 | 5.0 | 90.13 |
| 沙拉沙星 | 5.0 | 80.10 |
水中氯霉素、磺胺類、四環(huán)素類、脫水紅霉素以及喹諾酮類等14種抗生素的測定
1、適用范圍
適用于水中氯霉素、磺胺類、四環(huán)素類、脫水紅霉素以及喹諾酮類等抗生素檢測，氯霉素的檢出限是0.1 ng /L，磺胺嘧啶的檢出限是0.8 ng /L，磺胺甲基嘧啶的檢出限是1.2ng /L，磺胺吡啶的檢出限是0.9 ng /L，磺胺二甲嘧啶的檢出限是2.3 ng /L，磺胺甲氧噠嗪的檢出限是0.6 ng /L，土霉素的檢出限是29 ng /L，金霉素的檢出限是35 ng /L，四環(huán)素的檢出限是20 ng /L，脫水紅霉素的檢出限是1.1 ng /L，馬波沙星的檢出限是14.2 ng /L，沙拉沙星的檢出限是13.0 ng /L，恩諾沙星的檢出限是4.8 ng /L，雙氟沙星的檢出限是8.8 ng /L。
2、提取
(1) 水樣以0.45 μm濾膜除去懸浮物。
(2) 取200 mL水樣和100 mL Mcllvaine緩沖液*，混勻，準(zhǔn)備凈化。
*Mcllvaine緩沖液(pH 4.0)：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6 g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9 g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2 g,用水溶解后稀釋并定容至1000 mL。
3、凈化——ProElut PLS 150 mg/6 mL（Cat.# 68004）
| a活 化： | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液棄去； |
| b上 樣： | 加入待凈化液，流出液棄去； |
| c淋 洗： | 加入10 mL 水，流出液棄去，推干小柱； |
| d洗 脫： | 加入5 mL甲醇，收集流出液； |
| e重新溶解： | 將流出液在35 ℃下減壓蒸至近干，用水定容至1 mL，供HPLC分析。 |
4、色譜條件
4.1 液相條件
4.1.1 氯霉素液相條件
色譜柱：Endeavorsil C18, 100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm（Cat.# 87003）
流 速：0.2 mL/min
進(jìn)樣量：5 μL
柱 溫：40 ℃
流動相：A：10 mmol/L乙酸銨溶液，B：乙腈
梯度設(shè)置
| 時間/Min. | 0 | 4 | 4.5 | 6 | 6.5 | 12 |
| A（%） | 20 | 50 | 90 | 90 | 20 | 20 |
| B（%） | 80 | 50 | 10 | 10 | 80 | 80 |
4.1.2 其它抗生素液相條件
色譜柱：Endeavorsil C18, 100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm（Cat.# 87003）
流 速：0.2 mL/min
進(jìn)樣量：5 μL
柱 溫：35 ℃
流動相：A：0.4%甲酸水，B：甲醇-乙腈-甲酸（40：60：0.4）
梯度設(shè)置
| 時間/Min. | 0 | 4.5 | 5.5 | 7.5 | 8 | 15 |
| A（%） | 80 | 80 | 0 | 0 | 80 | 80 |
| B（%） | 20 | 20 | 100 | 100 | 20 | 20 |
4.2 質(zhì)譜條件
4.2.1 氯霉素質(zhì)譜條件
| 電離模式： | ESI | 掃描方式： | 負(fù)離子掃描 |
| 檢測方式： | 多反應(yīng)監(jiān)測 | 電噴霧電壓： | -4500 V |
| 霧化氣壓力： | 50 psi | 輔助氣壓力： | 50 psi |
| 氣簾氣壓力： | 20 psi | 離子源溫度： | 500 ℃ |
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
| 藥物名稱 | 定性離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 定量離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/ V | 去簇電壓/ V |
| 氯霉素 | 321.0/151.8 | 321.0/151.8 | -24 | -80 |
| 321.0/256.9 | -15 |
4.2.2 其它抗生素質(zhì)譜條件
| 電離模式： | ESI | 掃描方式： | 正離子掃描 |
| 檢測方式： | 多反應(yīng)監(jiān)測 | 電噴霧電壓： | 5500 V |
| 霧化氣壓力： | 50 psi | 輔助氣壓力： | 50 psi |
| 氣簾氣壓力： | 20 psi | 離子源溫度： | 500 ℃ |
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
| 藥物名稱 | 定性離子對 | 定量離子對 | 碰撞氣能量/ V | 去簇電壓/ V |
| （m/z） | （m/z） | |||
| (母離子/子離子) | (母離子/子離子) | |||
| 馬波沙星 | 363.2/320.2 | 363.2/320.2 | 24 | 82 |
| 363.2/277.4 | 24 | |||
| 沙拉沙星 | 386.2/342.2 | 386.2/342.2 | 24 | 92 |
| 386.2/299.2 | 35 | |||
| 雙氟沙星 | 400.2/356.2 | 400.2/356.2 | 27 | 100 |
| 400.2/299.3 | 37 | |||
| 恩諾沙星 | 360.3/316.1 | 360.3/316.1 | 26 | 80 |
| 360.3/245.2 | 34 | |||
| 磺胺嘧啶 | 251.1/156.0 | 251.1/156.0 | 21 | 60 |
| 251.1/184.9 | 28 | |||
| 磺胺甲基嘧啶 | 265.1/156.0 | 265.1/156.0 | 22 | 82 |
| 265.1/172.1 | 22 | |||
| 磺胺吡啶 | 250.2/156.1 | 250.2/156.1 | 20 | 53 |
| 250.2/184.0 | 21 | |||
| 磺胺二甲嘧啶 | 279.1/186.1 | 279.1/186.1 | 23 | 54 |
| 279.1/156.1 | 22 | |||
| 磺胺甲氧噠嗪 | 281.0/156.1 | 281.0/156.1 | 22 | 65 |
| 281.0/215.1 | 22 | |||
| 四環(huán)素 | 445.2/410.1 | 445.2/410.1 | 23 | 80 |
| 445.2/154.0 | 36 | |||
| 金霉素 | 479.2/444.4 | 479.2/444.4 | 29 | 97 |
| 479.2/462.4 | 22 | |||
| 土霉素 | 461.2/425.9 | 461.2/425.9 | 25 | 80 |
| 461.2/443.3 | 16 | |||
| 脫水紅霉素 | 716.5/558.4 | 716.5/558.4 | 19 | 80 |
| 716.5/158.3 | 40 |
5、添加回收結(jié)果
水中14種抗生素的LC-MS/MS檢測添加回收結(jié)果
| 藥物名稱 | 添加水平（ng/L） | 回收率(%) |
| 馬波沙星 | 50.0 | 80.6 |
| 沙拉沙星 | 50.0 | 73.0 |
| 雙氟沙星 | 50.0 | 75.6 |
| 恩諾沙星 | 50.0 | 87.9 |
| 磺胺嘧啶 | 50.0 | 78.4 |
| 磺胺甲基嘧啶 | 50.0 | 80.6 |
| 磺胺吡啶 | 50.0 | 74.9 |
| 磺胺二甲嘧啶 | 50.0 | 92.5 |
| 磺胺甲氧噠嗪 | 50.0 | 70.4 |
| 四環(huán)素 | 50.0 | 86.7 |
| 金霉素 | 50.0 | 72.6 |
| 土霉素 | 50.0 | 95.0 |
| 脫水紅霉素 | 50.0 | 93.0 |
| 氯霉素 | 50.0 | 87.9 |
水中抗生素藥物檢測相關(guān)產(chǎn)品信息
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| 樣品前處理 | ||
| 68004 | 親水親酯平衡萃取柱 ProElut PLS | 150 mg/6 mL, 30/pkg |
| 244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
| 99017 | 大容量采樣管 （含1,3,6mL柱管通用連接器） | 4/pk |
| 4812 | 60 mL 空柱管 | 100/pk |
| 4803 | 1,3,6 mL柱管通用連接器 | 15/pk |
| 4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
| 99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
| 99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
| 30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
| 30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
| 色譜柱及保護(hù)柱 | ||
| 87003 | UHPLC柱 Endeavorsil C18 | 100 × 2.1 mm, 1.8 μm |
| 99603 | 反相液相色譜柱Diamonsil C18(2) | 250 × 4.6 mm ID, 5 μm |
| 6201 | EasyGuard C18 保護(hù)柱套裝 | 10 × 4.0 mm 2個柱芯+1個柱套 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | ||
| 12-N-13250-250MG | 磺胺吡啶[144-83-2] | 250 mg |
| 56-35033-100MG | 磺胺嘧啶[68-35-9] | 100 mg |
| 12-N-13244-250MG | 磺胺甲基嘧啶[127-79-7] | 250 mg |
| 12-N-13245-250MG | 磺胺二甲基嘧啶[57-68-1] | 250 mg |
| 56-46858-250MG-R | 磺胺甲氧噠嗪[80-35-3] | 250 mg |
| 56-31667-250MG | 氯霉素[56-75-7] | 250 mg |
| 55-34039-100MG | 馬波沙星[115550-35-1] | 100 mg |
| 56-17849-5G-F | 恩諾沙星[93106-60-6] | 5 g |
| 56-33984-100MG-R | 雙氟沙星鹽酸鹽[91296-86-5] | 100 mg |
| 50D-405234-10MG | 沙拉沙星[98105-99-8] | 10 mg |
| 55-31741-250MG | 四環(huán)素鹽酸鹽[64-75-5] | 250 mg |
| 56-PHR1520-500MG | 金霉素鹽酸鹽[64-72-2] | 500 mg |
| 46359 | 土霉素鹽酸鹽[2058-46-0] | 100 mg |
| 56-19448-2MG | 脫水紅霉素A[23893-13-2] | 2 mg |
| HPLC溶劑Ÿ緩沖鹽Ÿ離子對試劑 | ||
| 50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
| 50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
| 50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
| 50132 | 乙酸 HPLC級 | 50 mL |
| 50133 | 磷酸 HPLC級 | 50 mL |
| 50138 | 乙酸銨 HPLC級 | 100 g |
| 50158 | 磷酸氫二鈉 無水 HPLC級 | 100 g |
| 通用色譜產(chǎn)品 | ||
| 52401A | 瓶架/白色 | 50 孔 |
| 52401B | 瓶架/藍(lán)色 | 50 孔 |
| 1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
| 1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經(jīng)組裝） | 100/pk |
| H80465 | HPLC 進(jìn)樣針 | 25 μL |
紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*