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反相鍵合相色譜柱性能影響因素
影響色譜柱性能的物理參數(shù)
(1) 硅膠純度
硅膠純度和殘留金屬離子濃度，硅膠的雜質(zhì)會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。
(2) 色譜柱尺寸
填料床的長度和內(nèi)徑，增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑，可減少橫向擴散，但壓力較大，對系統(tǒng)要求較高。
(3) 顆粒形狀及粒徑
球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻，不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動相線速度不均勻，容易譜帶展寬；平均顆粒直徑，粒徑越小，柱效越高，柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低，壓力越大。
(4) 顆粒表面積
顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和，以m2/g表示，相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力，更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達到平衡狀態(tài)，更適合梯度洗脫程序。
(5) 孔徑
顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍是80~300Å，大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時間，改善分離，所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。
影響色譜柱性能的化學因素
(1) 鍵合類型及鍵合相
鍵合相分子與基體單點相連為單體鍵合，這種鍵合方式可以提高傳質(zhì)速率，縮短柱平衡時間，；聚合體鍵合為鍵合相分子與基體多點相連，這種鍵合方式可以增加色譜柱穩(wěn)定性，增加載樣量。而鍵合相不同會直接影響化合物的保留行為。
(2) 碳覆蓋率
高碳覆蓋率可以提高分辨率和重現(xiàn)性，但分析時間長。
(3) 封端
硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基，如圖封端可以減輕待測組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)，改善保留和峰行，這對于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術(shù)也會直接影響色譜柱的效能。