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產(chǎn)品簡介

      流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞DNA含量,通過染色定量分析DNA,亦可通過熒光顯微鏡觀察形態(tài)變化。

      AO屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記 DNA、RNA，屬于異染性熒光染 料。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于細(xì)胞內(nèi) DNA 和 RNA 進(jìn)行檢測。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對之間， 這種結(jié)合方式主要為 AO 與 DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸 引，帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒 光。因此，AO嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色，與 DNA 單鏈或 RNA 結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色 熒光。
AO染色液(1mg/ml)為儲存液，使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀 察，AO可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固 縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片 顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。AO染色常與 EB 染色合用雙染，因 EB 只染死細(xì)胞使 之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
 

自備材料

熒光顯微鏡，低速離心機(jī) ，PBS，細(xì)胞計(jì)數(shù)板 ，載玻片、蓋玻片 

操作步驟(僅供參考)：

      1、 收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用 PBS 清洗細(xì)胞 1 次，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃 度至 106/ml。
      2、 取適量的細(xì)胞懸液，加入 AO Stain(1mg/ml)，使 AO 終濃度為 8.5～17µg/ml，輕輕混 勻。
      3、 室溫避光染色 15～20min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。
      4、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長 488nm，阻斷濾光片波長 515nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

注意事項(xiàng)：

      1、 AO Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨(dú)使用。
      2、 AO染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
      3、 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。
      4、 操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
      5、 試劑有一定毒性，請小心操作。
      6、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

備注：以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), Solarbio暫未進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.