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膠回收常見問題及對(duì)策
閱讀：1861 發(fā)布時(shí)間：2010-12-91. 沒有回收到DNA片段
如在洗脫后，發(fā)現(xiàn)洗脫液中沒有DNA 片段，請檢查是否按瓶身標(biāo)簽，在洗滌液中加入了無水乙醇。
2. 提取率低
1） 融膠液為酸性緩沖液，如融膠后，其pH 值升高將影響提取得率。請加入0.1 倍體積的3M 乙酸鉀（pH5.0）。
2） 長時(shí)間使用后沒有更換的電泳緩沖液，其pH 值較高，將影響DNA 的吸附。請更換新的電泳緩沖液后，再進(jìn)行電泳，然后切膠。
3） 回收片斷大小影響回收效率（見下圖）；
4） 在洗脫前，將洗脫液于30～60℃溫浴，可提高提取效率適當(dāng)延長洗脫時(shí)間可增加回收效率。
5） 正確估計(jì)膠大小，確保加入足夠量的Binding Buffer；使膠*融解；
6） 提高Binding Buffer用量可提高小片斷DNA回收效率.對(duì)于<100bp的DNA片斷,可加入6倍體積的Binding Buffer；
3. 吸光度測量結(jié)果問題
吸光度測量的是未知樣品與調(diào)零標(biāo)準(zhǔn)之間的相對(duì)吸光度，所以請用與洗脫液體相同的液體，對(duì)測量樣品進(jìn)行稀釋和調(diào)零。
4.如何計(jì)算提取率
1） 由于回收前樣品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用測回收前后吸光度的的方法計(jì)算回收率。
2） 可將回收前后DNA 片段一起電泳，使用凝膠成像系統(tǒng)拍照后，用配套的軟件進(jìn)行電泳條帶灰度對(duì)比。
3） 注意，電泳條件及拍攝條件將對(duì)灰度對(duì)比結(jié)果造成很大影響，請仔細(xì)操作，以減小誤差。
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