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抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA）檢測
閱讀：624 發(fā)布時間：2010-12-18男性體內的血睪屏障可使精子與免疫系統隔離。但當此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時，精子或其可溶性抗原逸出，可導致機體產生自身抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA），從而抑制精子產生，造成男性不育。女性生殖道具有酶系統，能降解進入的精子抗原，使其不能達免疫系統。此種酶系統的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產生。大約10％～30％原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致。
測定ASA的方法很多，目前常用的有熒光抗體法，淺盤微量凝集法，伊紅Y染色法，試管或玻片凝集法，固相酶染色法，免疫珠法，免疫洗選法（panning法）及ELISA法等。這些方法各有利弊，都不能*臨床快速診斷的要求。莊南等（1991）在ELISA反應系統中，加入適量的PEG，可使每步反應時間在10min內完成，同時用DW-T快速沖洗代替常規(guī)的PBS-T洗滌方法，從而能在40rain內完成檢驗。且該法有較高特異性和精密度，適用于常規(guī)工作?，F介紹快速ELISA法檢測抗精子抗體。
1．試劑 ①人精子膜抗原：取20份正常生育男性的精液，液化后，用PBS洗5次，沉淀的精子混懸于含0．5％NP-40（FLUKA）的Tris-HCl緩沖液中，4℃1h，17 000Xg離心30min，取上清液測定蛋白量，即為精子膜抗原；②HRP標記的羊抗人丁球蛋白；③4％和8％PEG-PBST緩沖液：0．01mol／L，pH7．4PB加入NaCl達0．85％，Tween-20為0．05％及PEG6000為4％或8％。
2．操作步驟 將精子膜抗原用包被液按1：100稀釋，包被反應板微孔，每孔100uL，4℃過夜，用含0．05％Tween-20的蒸餾水（DW-T）洗3次，每孔加待測血清50uL，同時設性、陽性和空白對照孔，43℃10rain，DW-T洗3次后，加zui適工作濃度的HBP標記的抗人γ球蛋白（用含0％小牛血清的4％PEG-PBST作1：1 000稀釋），每孔100uL，43℃10min；DW—T洗3次，加底物（OPD-H202）溶液，每孔100yL，37％10min使呈色，用2mol／LH2S04 50gL終止反應，測492nm波長吸光度值（A），以P／N≥2．1為陽性。
3．臨床意義 ASA的檢出率因采用的檢測方法不同，結果也不一致。通常不育者血清中ASA檢出率在10％—30％左右。尤其是梗阻性無精癥病人，ASA陽性率可高達60％。ASA的出現以及滴度升高是造成免疫性不育、不孕的根本原因，因而ASA的檢測對不育的臨床治療和預后的判斷提供了有價值的指標。