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用抗人抗體包被微珠
閱讀：834 發(fā)布時(shí)間：2011-1-4[器材和試劑]
● 磁珠（Dynabeads M-450，甲苯磺?；罨?，Dynal）
● 硼酸鹽緩沖液（50mmol/L硼酸鈉，pH 9．5）
每 抗人Fc多克隆抗體（免疫純的羊抗人IgG Fc片段特異性抗體，Pierce）
● 磁分離器（Dynal）
● PBS（磷酸鹽緩沖液： 2mmol/L NaH2PO4 H20， 16mmol/L Na2HPO4·2H20， 15mmol/L NaCl）
● PBBS （PBS， 0．1％BSA）
● 硫柳汞（Sigma）
[方法]
1．將500ul已充分混懸的磁珠轉(zhuǎn)移到1支Eppendorf管中。將該管置于磁分離儀中，除去液體。
2．將磁珠懸浮于1m1硼酸鹽緩沖液中，混合，再如上除去上清液。
3．將磁珠懸浮在含有75ug抗人Fc特異性多克隆抗體的硼酸鹽緩沖液中，定容到1m1；在轉(zhuǎn)輪上，室溫孵育24h。
4．用磁分離儀去除上清液，將磁珠轉(zhuǎn)移到一個(gè)含10mlPBBS的Falcon管中。4℃旋轉(zhuǎn)洗滌磁珠，10分鐘1次，30分鐘3次，過(guò)夜。每次洗滌后，將含有磁珠的試管插入合適的磁分離儀中除去上清。