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檢測(cè)大腸桿菌的PCR技術(shù)
閱讀：792 發(fā)布時(shí)間：2011-1-19 中美學(xué)者合作，對(duì)3．3kb的DNA探針進(jìn)行了序列分析，發(fā)現(xiàn)其編碼EHEC溶血素AB基因，此基因與已發(fā)表的泌尿道大腸桿菌等的溶血素在DNA序列和氨基酸序列有所不同，是EHEC*的，并以此為基礎(chǔ)，發(fā)展了PCR檢測(cè)方法。此法特異、敏感、快速，可在3—4h左右出結(jié)果。
Brian等針對(duì)VT基因A亞單位分別設(shè)計(jì)出SLTl引物和SLT2引物和雜交用的寡核苷酸探針。兩對(duì)引物可同時(shí)擴(kuò)增EHEC的SLTl和SLT2，先后擴(kuò)增出370bp和283bp的產(chǎn)物，并用放射性探針予以證實(shí)，而非EHEC擴(kuò)增為陰性。這種方法還可檢測(cè)小到一個(gè)細(xì)菌的基因組，并可用來(lái)檢測(cè)大便中的DNA而無(wú)需預(yù)先分離和培養(yǎng)細(xì)菌。
另外，F(xiàn)ratamico等還設(shè)計(jì)了一種多重PCR方法，即利用EHEC所*的eoe基因、SLTl和SLT2、60Mμ質(zhì)粒的保守序列設(shè)計(jì)的多重引物，成功地同時(shí)擴(kuò)增得到了1087bp（eaeA）、227bp和224bp（SLTl和SLT2）、166bp（質(zhì)粒），這種多重PCR方法靈敏、特異和快速，可用來(lái)診斷產(chǎn)SLT的0157所致的疾病，也可對(duì)糞便標(biāo)本的增菌培養(yǎng)物直接進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果比傳統(tǒng)的SMAC漏檢率減少。Venkateswaran等還用復(fù)合PCR-簡(jiǎn)單過(guò)濾技術(shù)檢測(cè)出牛肉中含有的腸出血性大腸桿菌0157；H7及其毒素。