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檢測炭疽免疫電化學(xué)與磁珠免疫熒光法
閱讀：818 發(fā)布時間：2011-7-6ECLIA基于電極表面Ru（bpy）2+3標(biāo)記抗體與過量TPA反應(yīng)產(chǎn)生光子的氧化還原反應(yīng)原理。整個反應(yīng)發(fā)生于磁珠與正極附近區(qū)域內(nèi)。炭疽芽孢桿菌檢測范圍為102一104CFU。捕獲抗體通過生物素2鏈親和素作用固定于磁珠表面。MPFIA應(yīng)用抗體包被的磁珠作為固相基質(zhì)，懸浮于溶液中，供菌體捕獲，整個反應(yīng)在微孔板中進(jìn)行。這樣捕獲抗體一細(xì)菌一堿性磷酸酶標(biāo)記抗體形成夾心，后者又作為報告者與堿性磷酸酶底物At-tophosTM發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生熒光，從而達(dá)到檢測之目的。ECLIA較MP-FIA敏感性至少高10倍。二者與傳統(tǒng)的ELISA相比優(yōu)勢在于：
①磁珠表面積大，抗體固定密度高；
②磁珠懸浮于溶液中，加快抗原-抗體反應(yīng)速度；
③臨床和生物樣品中靶細(xì)菌可直接被捕獲、分離，甚至在磁珠表面濃縮。
免疫檢測方法為研制炭疽芽孢桿菌檢測儀器提供了較大的空間，但還受到抗體數(shù)目、自然和基因工程變異的限制。大多數(shù)免疫學(xué)檢測方法靈敏度尚不能滿足軍事上1～100個細(xì)菌的需要。Dang等研究了芽孢滅活方法對檢測的影響。在直接ELISA中，無論是用多抗，還是用單抗，檢測丁射線滅活芽孢的信號都降低了近50％，而對高壓滅活的芽孢，用單抗檢測信號降低了83％，用多抗檢測信號增加了3倍，說明多抗以可溶性抗原-抗體為主，而單抗結(jié)合位點對高壓和丁射線均敏感。由此可見，不同芽孢滅活方法影響著核酸與免疫學(xué)檢測結(jié)果，在比較不同實驗室結(jié)果時需加以考慮。在標(biāo)本處理時，需考慮死芽孢與活芽孢的檢測對比問題，尤其是在高度可疑而檢測陰性時，一定要進(jìn)行檢測活芽孢試驗的對比。這一試驗還證明了滅活的芽孢檢測不會導(dǎo)致假陽性。