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技術(shù)文章

抗凝血因子Ⅷ抗體自身抗體

閱讀:643          發(fā)布時(shí)間:2011-8-22

1.同義詞 依據(jù)能否抑制FⅧ的功能,將抗FⅧ自身抗體分成兩種類型,即抑制型和功能型。抑制型抗體依據(jù)其對(duì)FⅧ的活性影響不同分為兩個(gè)亞型。亞型I按照劑量依賴方式*抑制FⅧ的功能,而亞型Ⅱ即使在高濃度情況下也不會(huì)*抑制FⅧ的功能。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是亞型I對(duì)自身抗原有著高親和性(相對(duì)于亞型Ⅱ而言)。而功能類型的抗FⅧ的抗體則不能抑制FⅧ的功能,即使它們是針對(duì)FⅧ的特異性抗體。
2.致病作用 無論功能型還是抑制型自身抗體都能通過明顯減慢FX轉(zhuǎn)化為FXa的速度來影響凝血系統(tǒng)中的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。其機(jī)制是,抗體能與那些直接影響蛋白水解作用的FⅧ分子的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合,從而影響酶的活性。同時(shí)抗體還能改變FⅧ分子的三維立體結(jié)構(gòu),從而降低其對(duì)酶的親和性。還有一種說法就是,由于抗FⅧ抗體自身不能*抑制FⅧ功能,機(jī)體會(huì)通過增加吞噬細(xì)胞(諸如肝枯否細(xì)胞等)對(duì)FⅧ免疫球蛋白復(fù)合物的攝人來加速對(duì)循環(huán)中FⅧ的清除。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),抗FⅧ的自身抗體優(yōu)先結(jié)合位點(diǎn)主要是FⅧ輕鏈C2區(qū)的羧基末端和重鏈A2區(qū)的氨基末端,其他位點(diǎn)則遍布于FⅧ分子,甚至包括含有一連串酸性氨基酸和FⅧ活性主要位點(diǎn)的輕鏈A3區(qū)。
3.檢測(cè)方法 定量檢測(cè)抗FⅧ抗體可以用混合稀釋法,即用定量的FⅧ與含有抗體的血漿結(jié)合,從而每毫升的抗體單位數(shù)則可以用中和FⅧ的血漿稀釋液的倒數(shù)來計(jì)算。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室通常采用“新牛津法”(FⅧ來源于濃縮血漿)和“巴塞得法”(FⅧ來源于正常血漿,且計(jì)算結(jié)果用巴塞得單位表示)。
色譜分析法也可以用來檢測(cè)抗FⅧ抗體,這種方法的原理是,經(jīng)凝血酶激活的FⅧ可以與FIXa共同作用于五色底物使其產(chǎn)生FXa,因此抗FⅧ抗體的濃度就與經(jīng)分光光度儀測(cè)出的光學(xué)濃度成一定的反比例關(guān)系,從而定量結(jié)果就是計(jì)算樣品能50%抑制色譜改變的倒數(shù)值。
以上方法都是著眼于FⅧ的非功能區(qū)檢測(cè)抗體,針對(duì)功能區(qū)而設(shè)計(jì)的方法也可以檢測(cè)抗體。一種方法是印跡技術(shù),它可以檢測(cè)出直接與不溶性FⅧ結(jié)合的抗體。方法如下:FⅧ經(jīng)電泳后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,將抗體與膜結(jié)合;或者將抗體直接結(jié)合到包被有FⅧ的聚苯乙烯板上。另一種方法是免疫沉淀,它可以檢測(cè)出與可溶性FⅧ分子或片段結(jié)合的抗體,方法如下:測(cè)定抗體與含F(xiàn)Ⅷ分子在凝膠中形成的免疫沉淀環(huán)直徑,這種方法的優(yōu)點(diǎn)是避免FⅧ分子的立體結(jié)構(gòu)區(qū)變更,從而減少因FⅧ分子的不溶性而產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果的概率。
在使用上述檢測(cè)方法時(shí),需注意到:由于不同F(xiàn)Ⅷ分子片段的表面序列相似性而造成抗體與分子的多個(gè)表位結(jié)合,這樣會(huì)影響蛋白質(zhì)印跡的結(jié)果。
4.臨床意義 對(duì)于臨床上任何一個(gè)伴有凝血時(shí)間延長(zhǎng)的、難以解釋的出血患者,應(yīng)立即考慮到檢測(cè)抗FⅧ抗體,因?yàn)檫@是由抗體介導(dǎo)的凝血異常的zui主要原因,而且大約有50%的帶有此抗體的患者沒有特殊的病理表現(xiàn)。在大約18%的自身免疫病的患者中,抗FⅧ的抗體效價(jià)與疾病的活動(dòng)性成比例關(guān)系。
目前對(duì)于這類帶有抗FⅧ自身抗體的自身免疫病的治療多采用非特異性免疫抑制療法,主要有單獨(dú)使用糖皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺,或者配合大劑量FⅧ溶液;有時(shí)還采用靜脈輸注免疫球蛋白,但療效不夠理想。

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