化工儀器網
技術文章
再生式序列復制反應直接擴增RNA靶序列
閱讀：795 發(fā)布時間：2012-6-30再生式序列復制反應（self-sustained sequence replication reaction，3SR）是一項與PCR類似的新技術。它利用3種酶（AMV逆轉錄酶、RNA酶H及T7RNA聚合酶）的活性，進行體外mRNA的擴增。
所用的引物A與待檢的RNA3’端互補，并在引物的5’端含一個T7RNA聚合酶的識別結合位點；引物B則與引物A引導合成的cDNA的3’端互補。3SR的基本原理是，在AMV逆轉錄酶的作用下，以靶mRNA為模板，在引物A的引導下合成cDNA*鏈，形成RNA／DNA雜交體。而RNA酶H則可破壞RNA／DNA雜交體中的模板RNA。
AMV逆轉錄酶同時還具有DNA聚合酶活性，此時以cDNA*鏈為模板，在引物B的引導下合成cDNA第二鏈，形成雙鏈cDNA。此cDNA的*鏈上帶有T7RNA聚合酶啟動子，在T7RNA聚合酶的作用下，即可合成與靶mRNA序列相同的RNA。新合成的RNA又可作為模板進入下一次循環(huán)，如此，以RNA／DNA和雙鏈cDNA為中間體，通過逆轉錄和轉錄反應的反復循環(huán)將靶mRNA擴增。
3SR反應產物以10的指數遞增，其擴增效率比PCR高，而反應時間明顯縮短，僅需15min。3SR是能將RNA靶序列直接擴增出來的一項十分有效的新技術。