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尿液中的濫用藥物殘留多次洗脫固相萃取凈化方法
閱讀：4773 發(fā)布時間：2010-5-21
尿液中的濫用藥物殘留多次洗脫固相萃取凈化方法
1. 樣品預處理
3mL尿液，加入4.5mL，0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0），調整pH值至6.3-6.3，加入β-葡萄糖苷酸酶，50℃水解2小時。
2. Bond Elut Certify SPE凈化
a. 活化：2mL甲醇，2mL水和2mL 0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預淋洗SPE柱床；
b. 上樣：磷酸鉀緩沖液液面與吸附劑平面水平時，立即上樣；
c. 淋洗：用2mL 1mol/L乙酸淋洗，隨后以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min；
d. 洗脫：
● 酸性和中性藥物用2mL氯仿/丙酮（ 3:1，v/v）洗脫，接收洗脫液1；
● 然后用2mL甲醇淋洗SPE柱，并再一次通空氣干燥3min；
● 堿性藥物用2mL含有2%的氨水的乙酸乙酯/二氯甲烷/ 2-丙醇（5:4:1,v/v）溶液進行洗脫，收集洗脫液2；
e. 洗脫液1經氮吹干燥，殘留物中加入100μL甲醇重新溶解，然后用4.5mL0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）稀釋；
3. Bond Elut Certify II SPE 凈化
a. 活化：2mL甲醇，2mL水和2mL 0.1mol/L磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預淋洗SPE柱床；
b. 上樣：處理后的洗脫液1，直接載入活化好的SPE柱；
c. 淋洗：用2mL 0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液淋洗柱床；
d. 以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min；
e. 洗脫，中性物質用2mL乙酸乙酯/丙酮（4 :1）或氯仿/丙酮（ 3:1）洗脫，酸性物質用2 mL甲醇洗脫，分別收集洗脫液3和4；
4. 檢測
● 堿性藥物洗脫液 經氮吹干燥后，用100μL甲醇和重氮甲烷的香精油溶液進行衍生化處理，放置10min后，氮吹干燥，然后用100μl乙酸乙酯溶解，進行GC-MS EI分析。
● 中性藥物洗脫液2經氮吹干燥，用100μL甲醇/水（1:1,v:v）重新溶解，進行LC-MS/MS分析；
● 酸性藥物洗脫液3經氮吹干燥，用100μL的Methelute溶劑（苯基-3-甲基氫氧化銨）重新溶解，進行GC-MS PCI檢測；
5. 樣品成分
非類固醇消炎止痛藥
卡布洛芬，clanobutin，扶他林，二氟尼酸，依爾替酸，依他尼酸，非諾洛芬，氟芬那酸，氟比洛芬，氟尼辛葡甲胺，呋塞米，吲哚美辛，吲哚洛芬，苯酮苯丙酸，痛立克，甲氯滅酸，甲滅酸，萘普生，舒林酸苯噻丙酸，托芬那辛，托麥汀，維達洛芬，佐美酸
皮質類固醇類藥物
強的松，氫化可的松，氟米松，氟美松，加強龍，醋酸曲安奈德，脫氧皮質酮
1. 樣品預處理
3mL尿液，加入4.5mL，0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0），調整pH值至6.3-6.3，加入β-葡萄糖苷酸酶，50℃水解2小時。
2. Bond Elut Certify SPE凈化
a. 活化：2mL甲醇，2mL水和2mL 0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預淋洗SPE柱床；
b. 上樣：磷酸鉀緩沖液液面與吸附劑平面水平時，立即上樣；
c. 淋洗：用2mL 1mol/L乙酸淋洗，隨后以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min；
d. 洗脫：
● 酸性和中性藥物用2mL氯仿/丙酮（ 3:1，v/v）洗脫，接收洗脫液1；
● 然后用2mL甲醇淋洗SPE柱，并再一次通空氣干燥3min；
● 堿性藥物用2mL含有2%的氨水的乙酸乙酯/二氯甲烷/ 2-丙醇（5:4:1,v/v）溶液進行洗脫，收集洗脫液2；
e. 洗脫液1經氮吹干燥，殘留物中加入100μL甲醇重新溶解，然后用4.5mL0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）稀釋；
3. Bond Elut Certify II SPE 凈化
a. 活化：2mL甲醇，2mL水和2mL 0.1mol/L磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預淋洗SPE柱床；
b. 上樣：處理后的洗脫液1，直接載入活化好的SPE柱；
c. 淋洗：用2mL 0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液淋洗柱床；
d. 以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min；
e. 洗脫，中性物質用2mL乙酸乙酯/丙酮（4 :1）或氯仿/丙酮（ 3:1）洗脫，酸性物質用2 mL甲醇洗脫，分別收集洗脫液3和4；
4. 檢測
● 堿性藥物洗脫液 經氮吹干燥后，用100μL甲醇和重氮甲烷的香精油溶液進行衍生化處理，放置10min后，氮吹干燥，然后用100μl乙酸乙酯溶解，進行GC-MS EI分析。
● 中性藥物洗脫液2經氮吹干燥，用100μL甲醇/水（1:1,v:v）重新溶解，進行LC-MS/MS分析；
● 酸性藥物洗脫液3經氮吹干燥，用100μL的Methelute溶劑（苯基-3-甲基氫氧化銨）重新溶解，進行GC-MS PCI檢測；
5. 樣品成分
非類固醇消炎止痛藥
卡布洛芬，clanobutin，扶他林，二氟尼酸，依爾替酸，依他尼酸，非諾洛芬，氟芬那酸，氟比洛芬，氟尼辛葡甲胺，呋塞米，吲哚美辛，吲哚洛芬，苯酮苯丙酸，痛立克，甲氯滅酸，甲滅酸，萘普生，舒林酸苯噻丙酸，托芬那辛，托麥汀，維達洛芬，佐美酸
皮質類固醇類藥物
強的松，氫化可的松，氟米松，氟美松，加強龍，醋酸曲安奈德，脫氧皮質酮
甲酯化或者重氮甲烷衍生化后通過GC-MS/MS檢測的中性和酸性藥物
乙醇和乙二醇類
麥酚生 ，美索巴莫，愈創(chuàng)藍油烴，心得安乙二醇代謝物
苯二氮平類
安定，去甲羥基安定，硝基安定，羥基安定
巴比妥類
戊巴比妥，戊巴比妥代謝物，苯巴比通 ，異戊巴比妥
其它藥物
苯坐卡因，普羅林坦內酰胺代謝物 ，*，安體舒通
利尿劑
雙氯非那胺，bendroflumethazide ，環(huán)戊氯噻嗪，喹乙唑酮，氯噻酮，氯噻，甲氯噻嗪，美托拉腙
Pyrazolidindiones
苯基丁氮酮，ketasone ，羥基保泰松，γ-羥基苯基丁氮酮
黃嘌呤類
咖啡因，茶堿 ，可可堿 ，1，7-二甲基黃嘌呤，羥乙基茶堿，己酮可可堿
其它雜環(huán)類藥物
丙基安替比林，美芬妥英，苯妥英，甲乙哌酮
乙醇和乙二醇類
麥酚生 ，美索巴莫，愈創(chuàng)藍油烴，心得安乙二醇代謝物
苯二氮平類
安定，去甲羥基安定，硝基安定，羥基安定
巴比妥類
戊巴比妥，戊巴比妥代謝物，苯巴比通 ，異戊巴比妥
其它藥物
苯坐卡因，普羅林坦內酰胺代謝物 ，*，安體舒通
利尿劑
雙氯非那胺，bendroflumethazide ，環(huán)戊氯噻嗪，喹乙唑酮，氯噻酮，氯噻，甲氯噻嗪，美托拉腙
Pyrazolidindiones
苯基丁氮酮，ketasone ，羥基保泰松，γ-羥基苯基丁氮酮
黃嘌呤類
咖啡因，茶堿 ，可可堿 ，1，7-二甲基黃嘌呤，羥乙基茶堿，己酮可可堿
其它雜環(huán)類藥物
丙基安替比林，美芬妥英，苯妥英，甲乙哌酮
本方法中使用的SPE柱：
Bond Elut Certify（130mg, 3mL,PN.12102051）和Bond Elut Certify II（200mg, 3mL, PN.12102080）。
Bond Elut Certify（130mg, 3mL,PN.12102051）和Bond Elut Certify II（200mg, 3mL, PN.12102080）。
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