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熒光分光光度計(jì)測(cè)量熒光強(qiáng)度為什么要設(shè)定兩個(gè)波長(zhǎng)?

閱讀:12543      發(fā)布時(shí)間:2021-7-27
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   熒光分光光度計(jì)使用的時(shí)候存在兩種模式,一種是固定Ex掃Em,一種是固定Em掃Ex,將一個(gè)范圍的Ex(如230nm~300nm)的ex所對(duì)應(yīng)的Em組合起來(lái)就是3D熒光。簡(jiǎn)單的說(shuō),Ex是激發(fā),也就是手電筒(光源),固定Ex的意思就是只用某個(gè)波長(zhǎng),如254nm作為光源來(lái)激發(fā)樣品,觀察的是固定該光源時(shí),樣品在不同波長(zhǎng)位置所展現(xiàn)的熒光強(qiáng)度(即em),簡(jiǎn)單的說(shuō),就是看光屏上的強(qiáng)度。這一模式是為了了解待測(cè)物在哪個(gè)波段有光致發(fā)光現(xiàn)象。而Em,也就是被激發(fā)的光(就是接收器上接收到的),這是在知道了我的樣品在哪一個(gè)位置發(fā)光(被激發(fā)后發(fā)光)后,或者說(shuō),選定一個(gè)我需要的發(fā)光位置后,看看哪一個(gè)波長(zhǎng)的光源對(duì)樣品激發(fā)效果更好。
 
  一個(gè)是激發(fā)波長(zhǎng),另一個(gè)是發(fā)射波長(zhǎng)。你得到一個(gè)新的樣品,你不知道它的激發(fā)波長(zhǎng),發(fā)射波長(zhǎng),那么辦呢。在前輩總結(jié)下,熒光分光光度計(jì)發(fā)現(xiàn)樣品的發(fā)射波長(zhǎng)波動(dòng)小,所以先確定發(fā)射波長(zhǎng)。沒(méi)有激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā),發(fā)射波長(zhǎng)也得不到。一般熒光樣品的激發(fā)波長(zhǎng)在300-410nm之間,你們可以查看同類物質(zhì)的激發(fā)波長(zhǎng)是多少,總結(jié)一下,在300—410nm中,先確定一個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)。在激發(fā)波長(zhǎng)的激發(fā)下,出現(xiàn)熒光強(qiáng)度變化圖譜,熒光強(qiáng)度最大的那個(gè)點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的發(fā)射波長(zhǎng),即圖的橫坐標(biāo)上的值,為發(fā)射波長(zhǎng)。以發(fā)射波長(zhǎng)確定最佳激發(fā)波長(zhǎng)原則,熒光分光光度計(jì)以上面的發(fā)射波長(zhǎng)為激發(fā)波長(zhǎng),再次得到一個(gè)光譜圖。在光譜圖中,同樣有一個(gè)最大熒光強(qiáng)度,這個(gè)強(qiáng)度所對(duì)應(yīng)的發(fā)射波長(zhǎng)就是你要找的最佳激發(fā)波長(zhǎng)。所以會(huì)有兩條圖線,就有兩個(gè)波長(zhǎng)。

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