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在使用熒光蛋白上樣緩沖液需要關(guān)注哪些細(xì)節(jié)?

閱讀:1273      發(fā)布時(shí)間:2021-8-24
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  熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對(duì)SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染,標(biāo)記上熒光。實(shí)驗(yàn)完成以后,凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析,無需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng),背景低??蓪?duì)所有蛋白進(jìn)行染色,不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中,游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率致,跑膠結(jié)束時(shí)移至凝膠末端,背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Western blot的SDS-PAGE。

  熒光蛋白上樣緩沖液在進(jìn)行蛋白樣品變性處理的同時(shí)對(duì)蛋白進(jìn)行預(yù)染色,電泳結(jié)束后即可直接使用凝膠成像儀的紫外光源或者LED燈觀察電泳結(jié)果。免去了染色法染色脫色的過程,不增加任何其它操作步驟,不使用任何有機(jī)溶劑,保護(hù)環(huán)境,實(shí)驗(yàn)室再無藍(lán)色污漬,電泳結(jié)束即可觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

  熒光蛋白上樣緩沖液在使用時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn):

  1. 請(qǐng)勿使用該上樣緩沖液處理預(yù)染的或預(yù)處理的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。這些產(chǎn)品與不兼容。
  2. 靈敏度影響因素:高pH(大于7)不會(huì)影響染色,低pH則會(huì)降低染色的效率,如果樣品的pH低于5,建議將pH調(diào)整7以上。
  3. 不適合在如下SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)中使用:切割蛋白條帶用以測(cè)序、質(zhì)譜分析或抗體制備。

  4. 建議-20℃避光保存,如果室溫放置2-3周,則可添加新的DTT,蛋白條帶會(huì)重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP,效果也很好。

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