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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2245-100T/96S果糖-1,6-二磷酸含量檢測(cè)試劑盒 微量法

果糖-1,6-二磷酸含量檢測(cè)試劑盒 微量法
  • 果糖-1,6-二磷酸含量檢測(cè)試劑盒 微量法
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號(hào) BC2245-100T/96S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-12-04 17:59:49瀏覽次數(shù):701評(píng)價(jià)

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分子量 詳詢(xún) 分子式 詳詢(xún)
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
貨號(hào) BC2245 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 測(cè)定意義:果糖1,6-二磷酸是機(jī)體內(nèi)的高能代謝物和代謝調(diào)控劑,是糖酵解途徑的重要
儲(chǔ)存條件
2-8℃
中文名稱(chēng)
果糖-1,6-二磷酸含量檢測(cè)試劑盒 微量法
有效期
6個(gè)月
單位

英文名稱(chēng)
Fructose-1,6-diphosphate(FDP)Content Assay Kit
別名
果糖-1,6-二磷酸試劑盒 FDP Kit 果糖-1,6-二磷酸(FDP)試劑盒 果糖-1,6-二磷酸(FDP)測(cè)試盒
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Micropl

果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

貨號(hào):BC2245

規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)

規(guī)格

保存條件

提取液一

液體60 mL×1

2-8℃保存

提取液二

液體10 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體10 mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體×2

2-8℃保存

試劑三

液體7 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體15 mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:臨用前取一支加入0.15 mL蒸餾水,充分溶解后待用,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融

2、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1176 μL 蒸餾水充分溶解,配制成50 μmol/mL果糖-1,6-二磷酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,2-8℃可以保存4周。

產(chǎn)品說(shuō)明:

果糖1,6-二磷酸(fructose-1,6-diphosphate, FDP)是糖酵解過(guò)程中的一種重要的中間產(chǎn)物,對(duì)多種酶具有調(diào)節(jié)作用,具有改善細(xì)胞能量代謝、增加能量利用、抗心律失常及抗組織過(guò)氧化等作用,廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)藥。

醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸裂解,產(chǎn)物與2,4-二* 苯 肼在酸性介質(zhì)中反應(yīng)生成2,4-二*苯腙,在堿性溶液中呈紅棕色,在540 nm處有特征吸收峰。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水和EP管。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))


組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無(wú)氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無(wú)氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無(wú)氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

注:提取液二需緩慢加入,加入后會(huì)產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進(jìn)行操作。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、 50µmol/mL的果糖-1,6-二磷酸標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水倍比稀釋為3.1251.5625、0.78125、0.390.2、0.1 µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

序號(hào)

稀釋前濃度(μmol/mL

標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

蒸餾水體積(µL

稀釋后濃度μmol/mL

1

50

30

930

1.5625

2

1.5625

200

200

0.78125

3

0.78125

200

200

0.39

4

0.39

200

200

0.2

5

0.2

200

200

0.1

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需40µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、 樣本測(cè)定:(1.5 mL離心管或96孔板中操作)

試劑名稱(chēng)(µL

對(duì)照管

測(cè)定管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

樣本

20

20

-

-

蒸餾水

-

-

20

-

標(biāo)準(zhǔn)溶液

-

-

-

20

試劑一

44

40

44

40

試劑二

-

4

-

4

充分混勻,37℃準(zhǔn)確反應(yīng)2 h

試劑三

40

40

40

40

充分混勻,37℃準(zhǔn)確反應(yīng)20 min

試劑四

100

100

100

100

充分混勻,37℃準(zhǔn)確反應(yīng)10 min

于微量玻璃比色皿/96孔板中測(cè)定540nm處吸光值A,分別記為A對(duì)照管、A測(cè)定管、A空白管和A標(biāo)準(zhǔn)管。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。(空白管和標(biāo)曲只需檢測(cè)1-2次)

三、FDA含量計(jì)算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b,將ΔA帶入方程得到xµmol/mL)。

2、FDP含量的計(jì)算:

1)按樣本質(zhì)量計(jì)算

FDP含量(µg/g 質(zhì)量)=x×(V上清+V提取液二)×M÷(W×V上清÷V提取液一)=403.75x÷W

2)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FDP含量(µg/104 cell=x×(V上清+V提取液二)×M÷(V上清÷V提取液一×N)=403.75x÷N

3)按液體體積計(jì)算

FDP含量(µg/mL=x×V上清+V提取液二)×M÷ [V液體×V上清÷V提取液一+V液體)]=4441.25x

V上清:提取時(shí)上清液體積,0.8mL;V提取液二:提取液二的體積,0.15mL;V提取液一:提取液一的體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;M:果糖-1,6-二磷酸分子質(zhì)量,340V液體:液體樣本體積,0.1mLN:細(xì)胞數(shù)量,以萬(wàn)計(jì)。

注意事項(xiàng):

當(dāng)ΔA測(cè)定大于0.5時(shí),建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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果糖-1,6-二磷酸含量檢測(cè)試劑盒 微量法   果糖-1,6-二磷酸含量檢測(cè)試劑盒 微量法  


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