胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用: CHIP
實驗意義:
染色體免疫沉淀技術(Chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的技術,用于闡明真核生物基因表達機制的基本途徑,CHIP可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用,還可以研究組蛋白的各種共價修飾
和基因表達之間的關系,在基因表達調(diào)控研究中發(fā)揮著重要的作用。CHIP是表觀遺傳信息研究的主要方法,是深入分析惡性腫瘤、癌癥、心血管疾病以及神經(jīng)退行性疾病等病理診斷和基礎與臨床研究的有效工具。
實驗原理
染色體免疫沉淀技術(Chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)分析的是細胞內(nèi)生理狀態(tài)下DNA結合蛋白與基因組DNA相互作用的技術,也稱作結合位點分析法,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結合位點或者組蛋白特異性修飾位點的研究。基本原理是
在活細胞的狀態(tài)固定DNA-蛋白質(zhì)復合物,然后通過免疫學的方法沉淀復臺物,特異性地富集純化后,對其進行檢測,從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。后續(xù)的分析檢測可以通過定量PCR. Western Blot. CHIP-Seq. CHIP-chip (微陣列芯芯分析)。
實驗流程
1.甲醇固定細胞:
2.超聲破碎; .
3.目的蛋白的抗體孵育:
4.加入Protein A,結合抗體靶蛋白-DNA復合物,沉淀:
5.洗脫后得到室集的靶蛋白-DNA復合物;
6.分離富集的DNA和蛋白質(zhì):
7.分析檢測。
結果展示
實驗完成周期及交付標準
實驗周期: 1-3個月
交付標準: CHIP鑒定結果報告、 分析報告、實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)、原始數(shù)據(jù)等
實驗需與客戶確認的信息
1.目的基因與蛋白信息。
2、樣本類型與種屬
3、是否提供抗體
部分實驗代做服務
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