檢測器的作用是將色譜柱流岀物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號。液相色譜檢測器共有6種，檢測不同的物質(zhì)選擇不同的檢測器，今天，小析姐就和小伙伴一起看看各種檢測的原理及選擇方法。
檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。
檢測器分類
A.選擇性檢測器：組分性質(zhì)
1、紫外可見吸收檢測器(UVD)
2、熒光檢測器(FD)
B.通用型檢測器：總體性質(zhì)
3、蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)
4、電化學(xué)檢測器(ED)
5、示差折光檢測器(RID)
01.紫外可見吸收檢測器
紫外可見吸收檢測器(ultraviolet-visibledetector，UVD)是HPLC中應(yīng)用*泛的檢測器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強吸收物質(zhì)檢測限可達(dá)1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似，實際上就是裝有流動地的紫外可見光度計。
(1)紫外吸收檢測器
紫外吸收檢測器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長，并安裝一個光柵型單色器，其波長選擇范圍寬(190nm～800nm)。它有兩個流通池，一個作參比，一個作測量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強度相等，無信號輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測量池時，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強度不等，這時有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。
局限：流動相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動相，每種溶劑都有截止波長，當(dāng)小于該截止波長的紫外光通過溶劑時，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長。
(2)光電二極管陣列檢測器(photodiodearraydetector，PDAD)
也稱快速掃描紫外可見分光檢測器，是一種新型的光吸收式檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時檢測由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號，然后對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速決定具有*性和靈敏度的波長。
單光束二極管陣列檢測器，光源發(fā)出的光先通過檢測池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。
02.熒光檢測器
熒光檢測器(fluorescencedetector，F(xiàn)D)是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測。其最小檢測濃度可達(dá)0.1ng/ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。
近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
03.示差折光檢測器
示差折光檢測器(differentialrefractiveIndexdetector，RID)是一種濃度型通用檢測器，對所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測器檢測的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測器檢測。示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。
光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。
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電化學(xué)檢測器
電化學(xué)檢測器(electrochemicaldetector，ED)主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導(dǎo)等檢測器，屬選擇性檢測器，可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機和有機陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導(dǎo)檢測器在離子色譜中應(yīng)用最多。
電化學(xué)檢測器的優(yōu)點是：
?、凫`敏度高，最小檢測量～般為ng級，有目可達(dá)pg級；
?、谶x擇性好，可測定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；
?、劬€性范圍寬，一般為4～5個數(shù)量級；
?、茉O(shè)備簡單，成本較低；
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05.化學(xué)發(fā)光檢測器
化學(xué)發(fā)光檢測器(Chemiluminescencedetector，CD)是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，因其設(shè)備簡單、價廉、線性范圍寬等優(yōu)點。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號變成電信號，就可進(jìn)行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達(dá)10-12g。
06.蒸發(fā)光散射檢測器
蒸發(fā)光散射檢測器(EvaporativeLight-scatteringDetector,ELSD)，能檢測不含發(fā)色團的化合物，如：碳水化合物、脂類、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性劑、藥物(人參皂苷、黃芪甲苷)，并在沒有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測未知化合物。
蒸發(fā)光散射檢測器的*檢測原理為，首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。
1、霧化：
液體流動相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細(xì)小的液滴，從而使溶劑更易于蒸發(fā)。液滴的大小和均勻性是保證檢測器的靈敏度和重復(fù)性的重要因素。蒸發(fā)光散射檢測器，通過對氣壓和溫度的精確控制，確保在霧化室內(nèi)形成一個較窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸發(fā)所需要的溫度大大降低。
2、蒸發(fā)：
載氣把液滴從霧化室運送到漂移管進(jìn)行蒸發(fā)。在漂移管中，溶劑被除去，留下微?；蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。蒸發(fā)光散射檢測器采用低溫蒸發(fā)模式，維持了顆粒的均勻性，對半揮發(fā)性物質(zhì)和熱敏性化合物同樣具有較好的靈敏度。
3、檢測：
光源采用激光，溶質(zhì)顆粒從漂移管出來后進(jìn)入光檢測池，并穿過激光光束。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過光電倍增管進(jìn)行收集。溶質(zhì)顆粒在進(jìn)入光檢測池時被輔助載氣所包封，避免溶質(zhì)在檢測池內(nèi)的分散和沉淀在壁上，極大增強了檢測靈敏度并極大地降低了檢測池表面的污染。
不同于紫外和熒光檢測器，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測，不受其官能團的影響。敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。
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