| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | 大鼠NK細(xì)胞 | |||
| 種屬來源 | 大鼠 | |||
| 組織來源 | 外周血 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 形態(tài)特征 | 圓形或橢圓形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 | |||
| 質(zhì)量檢測 | CD56和CD16免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等 | |||
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 培養(yǎng)基 | 大鼠NK細(xì)胞培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 換液頻率 | 每2-3天換液一次 | |||
| 消化液 | 0.25% | |||
| 產(chǎn)品貨期 | 4周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/順豐快遞（包郵） | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 背景介紹 | 自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達(dá)在NK和LAK細(xì)胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細(xì)胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。 自然殺傷細(xì)胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細(xì)胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用， 體外培養(yǎng)時加入上述細(xì)胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細(xì)胞的活性有抑制作用。 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨處理 | 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代代數(shù) | 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)，建議收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn) | |||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | |||
| 傳代方法 | 1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次； 2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化； 3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)； 4.待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。 | |||
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考 客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、注意事項(xiàng) | ||||
| 重要提醒 | 1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。 3.傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。 4.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 | |||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，部分?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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