| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | 人乳腺癌腫瘤干細胞 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 組織來源 | 乳腺癌 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 形態(tài)特征 | 不規(guī)則細胞 | |||
| 質(zhì)量檢測 | 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等 | |||
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 5x10 5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | |||
| 培養(yǎng)基 | 人乳腺癌腫瘤干細胞專用培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 換液頻率 | 每2-3天換液一次 | |||
| 消化液 | 0.25% | |||
| 產(chǎn)品貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/順豐快遞（包郵） | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 背景介紹 | 乳腺癌是一種嚴重影響女性健康甚至危及生命的惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展不僅是腫瘤細胞本身的作用，而且與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)。 乳腺癌作為女性見的惡性腫瘤之一，是發(fā)生在乳腺上皮組織的惡性腫瘤。發(fā)病常與遺傳相關(guān)。乳腺癌細胞具有高度的異型性，細胞形態(tài)及大小不等。 乳腺癌干細胞 是一群未分化、具有自我更新、一定多系分化潛能的細胞，是個在實體瘤中被鑒定的腫瘤干細胞。乳腺癌干細胞起源的假說有以下兩種，一種是乳腺癌干細胞起源于成體干細胞，通過遺傳改變獲得惡性行為，另一種是乳腺癌干細胞由早期祖細胞獲得了自我更新能力轉(zhuǎn)化而來。 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨處理 | 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài) | |||
| 復(fù)蘇步驟 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。 | |||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代步驟 | a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 細胞凍存 | a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考 客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、注意事項 | ||||
| 重要提醒 | 1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。 3.傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。 4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 | |||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑?，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)； 2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)； 6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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