EB染色試劑盒
細(xì)胞凋亡溴化乙啶（EB）染色試劑盒
（Cell Apoptosis Ethidium Bromide Detection Kit）
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Expire date：
一、試劑盒說(shuō)明
溴化乙啶（Ethidium Bromide EB）是一種DNA結(jié)合性熒光色素，其激發(fā)波長(zhǎng)510nm。發(fā)射波長(zhǎng)595 nm。產(chǎn)生桔紅色熒光。EB不具有膜通透性，不能透過(guò)活細(xì)胞膜，只能染死細(xì)胞，因此用EB單染時(shí)，正常細(xì)胞不著色，早期凋亡細(xì)胞呈微弱桔紅光，晚期凋亡細(xì)胞桔紅色熒光增強(qiáng)。而死細(xì)胞呈強(qiáng)桔紅光。而EB常與吖啶橙合用雙染進(jìn)行凋亡檢測(cè)，與吖啶橙雙染時(shí)，正常細(xì)胞中EB不能透膜著色，而吖啶橙可透過(guò)細(xì)胞膜，使細(xì)胞呈綠色均勻熒光，細(xì)胞圓形均勻；而在凋亡細(xì)胞中，細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)凝聚、固縮或斷裂，出芽，凋亡小體形成。染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色顆粒；而壞死細(xì)胞被EB染成桔紅色，由此熒光顏色和細(xì)胞形態(tài)可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
二、試劑盒組份
| 組分 | KGA216（100 assays） | 儲(chǔ)存條件 |
| 溴化乙啶 EB染液 | 500μL | 4℃，避光 |
| 10×Buffer A | 10 mL | 4℃ |
注: 1×Buffer A配制：用前用雙蒸水將10×Buffer A稀釋10倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、
四、使用注意事項(xiàng)
EB染液有毒，操作時(shí)要戴手套，需避光。
五、操作方法
1. EB單染
（1）收集細(xì)胞，1×Buffer A洗一次，加適量的1×Buffer A重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度約為106/mL；
（2）吸取95μL的細(xì)胞懸液和5μL的EB染液，輕輕混勻；
（3）室溫避光染色15min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；
（4）熒光顯微鏡，濾光片515nm觀察，計(jì)數(shù)、拍照。
正常細(xì)胞——細(xì)胞不被染色；壞死細(xì)胞——細(xì)胞具桔紅色熒光；
2. 與吖啶橙AO雙染
（1）收集細(xì)胞，1×Buffer A洗一次，加適量的1×Buffer A重懸，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度約為106/mL；
（2）吸取90μL的細(xì)胞懸液，加入EB染液和吖啶橙染液各5μL，輕輕混勻；
（3）室溫避光染色15min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；
（4）熒光顯微鏡，濾光片515nm觀察，計(jì)數(shù)、拍照。
正常細(xì)胞——細(xì)胞均勻染成綠色熒光；
壞死細(xì)胞——細(xì)胞桔黃色熒光；
凋亡細(xì)胞——染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂，被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆粒或見(jiàn)胞質(zhì)芽狀突起。
（5）計(jì)算細(xì)胞凋亡率和死亡率
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