DAPI染色試劑盒
細(xì)胞凋亡DAPI染色試劑盒
（Cell Apoptosis DAPI Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at4℃ for six months
Expire date：
一、試劑盒說明
DAPI （4,6-Diamidino-2-phenylindole，4,6-二氨基-2-苯基吲哚）是一種DNA特異性染料，與DNA產(chǎn)生非嵌入式結(jié)合，發(fā)出藍(lán)色熒光。該染料對細(xì)胞膜有半通透性，可透過正?；罴?xì)胞產(chǎn)生較弱的藍(lán)色熒光（細(xì)胞固定后熒光增強(qiáng)），而凋亡細(xì)胞的膜通透性增加，對其攝取能力增強(qiáng)，產(chǎn)生很強(qiáng)藍(lán)光染色。并且正常細(xì)胞的核形態(tài)呈圓形，邊緣清晰，染色均勻，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核邊緣不規(guī)則，細(xì)胞核染色體濃集，著色較重，并伴有細(xì)胞核固縮，核小體碎片增加，因此從熒光強(qiáng)度及核形態(tài)均可鑒別出細(xì)胞發(fā)生凋亡的典型特征。
二、試劑盒組份
| 組份 | KGA215（100 assays） | 儲存條件 |
| DAPI染液 | 10 mL | 4℃，避光 |
| Buffer A | 25 mL | 4℃ |
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、 甲醇
四、操作方法
1. 將DAPI染液用甲醇稀釋10-20倍，制備成1-2μg/mL的DAPI工作液（4 oC避光保存6個月）；
2. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞爬片觀察
2.1 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞爬片棄去培養(yǎng)基，加500μL的DAPI工作液洗一次；
2.2 再滴加入500μL的DAPI工作液，37℃染色15 min；
2.3 棄去染色液，甲醇漂洗一次，
2.4 滴加甘油或Buffer A，熒光顯微鏡以340/380nm紫外光激發(fā)，500×（40×12.5）（是100×油鏡頭）觀察、拍照；
3. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞觀察
3.1 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞離心收集后，加500μL的DAPI工作液洗一次；
3.2 再加入500μL的DAPI工作液重懸細(xì)胞，37℃染色15 min；
3.3 離心收集細(xì)胞，棄去染色液；
3.4 加入Buffer A重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上；
3.5 熒光顯微鏡以340/380nm紫外光激發(fā)，500×（40×12.5）（是以100 ×油鏡頭）觀察、拍照。
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