高效液相色譜常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器三種。
1、紫外檢測(cè)器
該檢測(cè)器適用于對(duì)紫外光(或可見(jiàn)光)有吸收性能樣品的檢測(cè)。其特點(diǎn)是,使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)、靈敏度高(檢測(cè)下限為10-10g/ml)、線性范圍寬、對(duì)溫度和流速變化不敏感、可檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。
2、示差折光檢測(cè)器
凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分,均可使用示差折光檢測(cè)器檢測(cè)。目前,糖類化合物的檢測(cè)大多使用此檢測(cè)系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單,但靈敏度低(檢測(cè)下限為10-7g/ml),流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測(cè)。
3、熒光檢測(cè)器
凡具有熒光的物質(zhì),在一定條件下,其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,這一檢測(cè)器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測(cè)定,其靈敏度很高(檢測(cè)下限為10-12~10-14g/ml),痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測(cè)均可采用。
HPLC常用的檢測(cè)器是紫外檢測(cè)器。在日常使用過(guò)程中紫外檢測(cè)器主要需要注意檢測(cè)池和氘燈的使用與維護(hù)。
1、檢測(cè)池:檢測(cè)池長(zhǎng)時(shí)間使用可能會(huì)造成污染,如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常,測(cè)量能量(SMPENERGY)偏低,可能為檢測(cè)池污染導(dǎo)致,可以對(duì)檢測(cè)池進(jìn)行清洗。
對(duì)檢測(cè)池零件的進(jìn)行清洗,一般先采用約1:4的硝酸溶液超聲清洗,分別用純水和甲醇溶液清洗,然后重新組裝并將檢測(cè)池池體推進(jìn)池腔內(nèi),擰緊池板螺絲。注意組裝中,池玻璃及墊片一定要放正,以免壓碎池玻璃,造成檢測(cè)池泄漏。
2、氘燈:氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上。燈的使用壽命與檢測(cè)器的使用時(shí)間和開(kāi)啟頻率有關(guān),因此使用過(guò)程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開(kāi)機(jī)時(shí)間,減少開(kāi)關(guān)頻率,以延長(zhǎng)氘燈的使用壽命。
如果地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低,則需要更換新的氘燈。在購(gòu)買氘燈時(shí),應(yīng)注意咨詢和核對(duì)氘燈的型號(hào)與儀器型號(hào)是否匹配。更換到氘燈時(shí),參照儀器說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)內(nèi)容,特別要注意氘燈連接線的位置順序。
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