熒光分析應用的范圍很廣。生物學和醫(yī)學的各個學科,包括生理、生化、 生物物理、藥理、免疫、細胞、遺傳等,都可以使用這一技術(shù)。從研究的材料來 看、氨基酸、蛋白質(zhì)核酸、維生素酶、藥物、毒物等都可以采用。下面就內(nèi)源熒 光和外源熒光在生物學、醫(yī)學中應用的可能性,舉一些例子。
一、內(nèi)源熒光的探測和應用
生物學中比較重要的天然熒光分子多屬具有共輪雙鍵的系統(tǒng)。如芳香氨基酸、核黃 素、維生素A、卟啉、葉綠素、NADH和tRNA中的Y堿基(二氫尿嘧啶)等。對于 含有這些天然熒光物質(zhì)的樣品,可以直接通達量測其熒光來確定其存在,分布及數(shù)量。
1、蛋白質(zhì)的內(nèi)源熒光
蛋白質(zhì)的熒光來自色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。它們的相對熒光強度為 100:9:0.5。檢測蛋白質(zhì)的天然熒光,可采用280nm的激發(fā)波長,發(fā)射波長范圍 在340-350(蛋白溶液為中性時)。如果蛋白中不含色氨酸,只含苯丙氨酸和酪 氨酸,則熒光光譜主要表現(xiàn)酪氨酸的特征,大發(fā)射波長約為304nm。對于含有 色氨酸的蛋白,熒光光譜則主要表現(xiàn)色氨酸的特征,大熒光發(fā)射在320-350nm 之間。
2、維生素的內(nèi)源熒光分析
維生素具有強的紫外線熒光效應,所以用熒光分析法檢測維生素,很早以前就開始了??梢杂脽晒夥治鰷y定的維生素有:維生素A,維生素B族,維生素C,維生素D,維生素E和維生素K等,這些維生素指的是物質(zhì)內(nèi)和人體內(nèi)的含量測量。 例如維生素A用345毫微米波長的紫外線激發(fā),在490毫微米處測溶液的熒光強度,然后由標準工作曲線求出維生素A的含量。
二、外源熒光的應用
熒光探針,即外源熒光技術(shù)。目前,熒光探針的種類已經(jīng)有上千種,人們可以根據(jù)所 研究問題的不同,選擇不同的熒光探針。
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