上海漢堯&熙華藥業(yè)
寡核苷酸類藥物的低殘留分析方法
實驗部分
結果討論
獲取進步
前言
寡核苷酸藥是一類由10～50個堿基構成的核苷酸類化合物，可以在RNA水平調控疾病相關基因的轉錄及翻譯過程。其分子量介于傳統(tǒng)小分子和大分子化合物之間，結構復雜，極性大，給相關的分析及質量研究工作帶來了挑戰(zhàn)。
目前，針對寡核苷酸藥物的色譜分析方法主要有陰離子交換色譜法、離子對色譜法以及毛細管電泳法等。但寡核苷酸藥物易與玻璃及金屬材質發(fā)生非特異吸附，導致嚴重的系統(tǒng)殘留，給分析工作帶來極大的挑戰(zhàn)。近期上海漢堯聯(lián)合熙華藥業(yè)使用YMC-BioPro QA-F色譜柱開發(fā)了一種基于離子交換原理的寡核苷酸藥物分析方法，旨在通過色譜柱及方法的優(yōu)化，減少該類樣品在常規(guī)色譜儀器上的非特異吸附問題。同時該方法的專屬性、靈敏度、重復性優(yōu)良，可以在不升級設備的前提下，直接用于寡核苷酸類藥物的常規(guī)分析檢測。
一
實驗部分
1
樣品
15-25個堿基對的短鏈寡核苷酸樣品
（由生工生物提供）
2
儀器及條件
高效液相色譜儀 | Agilent 1260 |
檢測器 | UV |
色譜柱 | YMC-BioPro QA-F (5μm, 100*4.6mm) |
YMC, P/N: QF00S05-1046WP
二
結果與討論
1
寡核苷酸混合對照品圖譜
圖1.15-25BP寡核苷酸混合對照品放大圖譜
（19BP和20個堿基對的寡核苷酸樣品未被有效分離）
2
殘留測試
圖2為50μg/ml寡核苷酸樣品溶液/空白溶液進樣前后的對比色譜圖，結果顯示色譜柱及系統(tǒng)殘留率僅為0.1%。
圖2.寡核苷酸溶液和空白溶液殘留對比圖譜
3
重復性
圖3結果表明本方法重現(xiàn)性和精密度良好。
圖3.50μg/ml樣品溶液重復性色譜圖
4
靈敏度
如圖4所示，通過推算，可以得知該方法的檢測限和定量限約為20ng/mL和50ng/mL。
圖4 0.5μg/mL樣品靈敏度溶液色譜圖
5
線性
如圖5所示，10-50 μg/mL范圍內O24的線性擬合結果，R2 ≥0.999。
圖5 10-50 μg/ml線性圖
實驗結論
綜上所述，
使用YMC-BioPro QA-F, 5μm, 100*4.6mm（P/N: QF00S05-1046WP）色譜柱開發(fā)的檢測寡核苷酸方法分離能力強，且該方法專屬性、精密度、工作曲線相關性等均非常優(yōu)異，在常規(guī)液相設備上殘留極小，可以作為寡核苷酸類藥物的含量及雜質控制的優(yōu)選解決方案。
關于熙華藥業(yè)
熙華藥業(yè)是上海熙華檢測技術服務有限公司的全資子公司，可提供符合中西方注冊申報要求的創(chuàng)新和仿制化學藥物的藥學CMC開發(fā)一體化服務，除此之外熙華藥業(yè)還有專門的中間體和符合cGMP的原料藥、臨床試驗用制劑生產車間。
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