H2S 含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定   

產(chǎn)品內(nèi)容：  

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。 

試劑四：液體15mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑五：液體 3mL×1 管，4℃避光保存。 

產(chǎn)品說(shuō)明： 

H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過(guò)程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。 

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)在 665nm處有大吸收峰，通過(guò)測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量。

需自備的儀器和用品：  

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)1ml玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品處理： 

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 ⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。 

3. 血清（漿）：直接測(cè)定。

二、測(cè)定步驟： （取1.5ml離心管，按照下表操作） 

三、H2S含量計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y = 0.0044x，R² = 0.9988

（1）組織樣品 

a.按照蛋白濃度計(jì)算 

H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V反總÷(V樣×Cpr)×10^-3=0.727×A665÷Cpr

b.按照樣本重量計(jì)算 

H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10^-3 = 0.727×A665÷W

（2）液體樣本

 H2S（μmol/L）= A665÷0.0044×V反總÷V樣= 727×A665

（3）細(xì)胞 

H2S（μmol/10⁴ cell）= A665÷0.0044×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))）×10^-3 =0.727×A665÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.25mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL。

WB實(shí)驗(yàn)代做報(bào)價(jià)