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萊姆Lyme酶免試劑盒（ELISA）說明書
點擊次數(shù)：1775 發(fā)布時間：2019-7-24
萊姆Lyme酶免試劑盒（ELISA）
廣州健侖生物科技有限公司
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【產(chǎn)品名稱】：萊姆病抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
1、用途: 本試劑盒用于定性/定量檢測血清或血漿中抗萊姆氏IgG抗體, 可以檢測所有萊姆氏螺旋菌亞型的感染
2、簡介: 萊姆病是一種蟬傳螺旋體感染性疾病。萊姆病的病原體為萊姆病螺旋體，能引起人類慢性游走性紅斑，以及心臟、神經(jīng)和關(guān)節(jié)等多系統(tǒng)受累的疾病，對人群健康危害較嚴(yán)重。萊姆病的實驗室診斷方法主要是血清學(xué)方法。本試劑盒采用特異性萊姆氏螺旋菌三個亞型的混合抗原進行微孔板包被,具有較高的檢測靈敏度和特異性。
3、檢測原理：采用夾心ELISA方法，將萊姆氏螺旋菌抗原包被于微孔板底部，檢測時，稀釋樣本及試劑盒質(zhì)控品加入微孔板，樣本中的抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體與抗原結(jié)合，經(jīng)過孵育，洗滌，加入HRP標(biāo)記的抗人IgG二抗，在經(jīng)過孵育，洗滌后加入HRP酶的底物顯色劑TMB，終止顯色，酶標(biāo)儀讀板，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或者Cutoff值判斷樣本的陰陽性。
4、注意事項和預(yù)防措施
1） 此試劑盒僅用于體外診斷和專業(yè)人士使用。
2） 在檢測開始之前，仔細(xì)和完整的閱讀說明書，使用試劑盒提供的包裝插件的有效版本， 確保所有的程序都清楚。
3） 檢測時請不要使用已被損害的試劑，以確保自身安全。
4） 按照批號和有效期，不混合使用不同批號的試劑，也不要使用過期的試劑。
5） 遵守好的實驗準(zhǔn)則和安全指南。穿實驗服，帶橡皮手套，有必要時請戴護目鏡。
6） 此試劑盒中含有會傷害眼睛和皮膚的有害試劑。請閱讀材料來源和標(biāo)簽獲取詳細(xì)信息。
7） 根據(jù)國家生物有害物質(zhì)及安全條例，所有化學(xué)藥品和準(zhǔn)備或使用過的試劑都應(yīng)當(dāng)做有害物質(zhì)進行處理。
8） 避免接觸終止液，以免刺激或著燒皮膚。
9） 試劑盒中的所有試劑（包括檢測過的人血清/血漿）對HIV/II,HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性,但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II,HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除.因此,所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進行處理
5、貯存與穩(wěn)定性
試劑盒和運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的包被板條在三個月內(nèi)穩(wěn)定，前提是將包被板條用袋子密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下。
6、樣品的采集與貯存
血清/血漿（EDTA抗凝）
按照一般原則進行靜脈采血。自樣品采集到檢測都應(yīng)保持血液樣品的完整性。不要使用易容血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，實驗前應(yīng)將其離心以除去顆粒物質(zhì)。 | |||
貯存 | 2-8℃ | ≤-20℃（分裝凍存） | 避免高溫和太陽直射，避免反復(fù)凍融。 |
穩(wěn)定性 | 5天 | 12個月 | |
7、試劑盒組份
1×12×8 | MTP | 包被板，可拆，微孔中包被了特異性抗原。 |
1×12mL | ENZCONJ | 酶聯(lián)結(jié)合物，綠色，即用性，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體 |
4×1.5mL | CONTROL A-D | A-D標(biāo)準(zhǔn)品: 含量為: 2; 10; 50; 200 U/mL，其中標(biāo)準(zhǔn)品B作為Cutoff標(biāo)準(zhǔn)品,內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體，穩(wěn)定劑 |
1.5mL | CONTROL+ | 陽性質(zhì)控，即用，內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體，穩(wěn)定劑 |
1.5mL | CONTROL- | 陰性質(zhì)控，即用，內(nèi)含人血清和穩(wěn)定劑。 |
1×100mL | DILBUF | 稀釋用緩沖液，藍色，內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑、BSA和穩(wěn)定劑 |
1×100mL | WASHBUF | 洗滌液（10×），內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑和穩(wěn)定劑。 |
1×12mL | TMB SUBS | TMB底物液，即用，內(nèi)含TMB。 |
1×12mL | TMB STOP | TMB終止液，即用，含1M H2SO4 |
8、實驗所需器材（但試劑盒不提供）
1） 移液器（Eppendorf移液器或類似儀器,CV＜3%），體積為5μL；100μL；1000μL
2） 漩渦混勻器
3） 37℃孵箱
4） 樣品稀釋用試管（1mL）
5） 帶有儲器的8道移液器。
6） 洗滌瓶，自動或半自動的包被板洗滌設(shè)備。
7） 可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀（參考波長：600-650nm）
8） 雙蒸水或去離子水
9） 坐標(biāo)紙，取樣吸頭，記時器。
9、實驗操作及注意事項
1） 樣品處理不合理或?qū)嶒灢僮鬟M行任何改動動都會影響實驗的結(jié)果。取樣體積、溫育時間、欲處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)移液器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。
2） 一旦實驗開始，所有的步驟都必須完整的進行下去，不允許中斷。把所有試劑和樣品都拿到18-25℃的實驗室中，在使用前，輕輕搖動液體試劑和樣本，試劑混合過程中要避免氣泡。
3） 請勿接觸試劑、移液器、微孔/試管。加試劑和樣本時，請使用新的取樣吸頭，以避免交叉污染。不用的試劑應(yīng)用蓋子蓋好，以免重復(fù)使用。
4） 用定標(biāo)儀對反應(yīng)板進行校準(zhǔn)。
5） 溫育時間會影響實驗結(jié)果。微孔加樣的順序和時間都必須一致。建議使用8道移液器加樣。
6） 包被板的清洗非常重要，微孔清洗不好將會形成錯誤的實驗結(jié)果。建議使用多道移液器或自動微孔清洗設(shè)備進行清洗。每次溫育間隔期間避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時要避免碰到包被孔。清洗和加試劑時都應(yīng)特別小心。清洗時，在微孔中的加入洗滌液緩沖液，同時確保無微孔中無殘渣。
7） 濕度會影響包被板，所以在未到達室溫時請勿打開包裝，未使用的包被板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。
8） 此實驗也可以在自動操作系統(tǒng)上進行，具體信息請見“性能”。
10、實驗前的準(zhǔn)備說明
10.1成分的準(zhǔn)備
稀釋/溶解 | 成分 |
| 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 有效期 |
100mL | 洗滌液 | 1000mL | 雙蒸水 | 1：10 | 有必要的話,加熱至18-25℃以溶解所有結(jié)晶 | 2-8℃ | 2-3月 |
10.2樣本稀釋
10.2.1 血清/血漿樣本
樣本 | 稀釋 | 試劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:101 | 10 μL樣品 + 1 mL 稀釋緩沖液 |
樣品中IgG濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)品含量的樣品必須進一步稀釋，并重復(fù)檢測。
10.2.2 腦脊液樣本:按照Reiber法進行腦脊液檢測時,有必要用使血清和腦脊液具有相同的濃度或相同的Cutoff判別范圍（OD值為1-0.1）,通過下面方式稀釋可以實現(xiàn):
樣本 | 稀釋 | 試劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:401 | 5μL樣品 + 2 mL 稀釋緩沖液 |
腦脊液 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:4 | 50μL樣品 + 150μL 稀釋緩沖液 |
Cutoff值可以通過1:101稀釋參數(shù)來校正,1:401稀釋血清Cutoff值,稀釋度乘以4。1:4稀釋的腦脊液Cutoff值，稀釋度除以25。
如果檢測樣本的OD值在1.0和0.1之外，則應(yīng)通過下列稀釋后，再檢測
血清/血漿 | 1：100 | 1：200 | 1：400 | 1：800 | 1：1600 |
腦脊液 | 1：2 | 1：4 | 1：8 | 1：16 | 1：32 |
