副溶血弧菌核酸檢測(cè)試劑盒
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副溶血弧菌核酸檢測(cè)試劑盒
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產(chǎn)品規(guī)格:48T/盒;
保存條件:避光 -20度 保存。
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將RNA溶解于DEPC H2O中,喺65℃中溫育10min左右,冷卻至室溫之后加等訂2×上呀緩沖液,撈勻后上柱,即刻有冇收集瀉液。當(dāng)RNA上呀液全部進(jìn)入柱床后,而且用一×上呀緩沖液洗柱,繼續(xù)有冇收集瀉液。
5.將所有瀉液于65℃加熱5min,冷卻至室溫后再次上柱,有冇收集瀉液。
6.用5-10倍柱床體積嘅一×上呀緩沖液洗柱,每理1ml分部有冇收集,OD260測(cè)定RNA含量。前地方有冇收集理中瀉液?jiǎn)﨩D260值好高,其內(nèi)含物為無(wú)Poly(A)落尾嘅RNA。后地方有冇收集理中瀉液?jiǎn)﨩D260值好低或者無(wú)吸走啲。
7.用2-3倍柱容積嘅打緩沖液打Poly(A)RNA,分部有冇收集,每地方為1/3-1/2柱體積。
8.OD260測(cè)定Poly(A)RNA分布,合并含Poly(A)RNA嘅有冇收集理,加1/10體積3M NaAc(pH5.2)、2.5倍體積嘅預(yù)凍無(wú)水乙醇,撈勻,-20℃放置30min。
9.4℃離心,10000g×15min,因住食棄上清。用70%乙醇洗滌沉淀。[注意:此時(shí)Poly(A)RNA嘅沉淀往往睇唔到]。4℃離心,10000g×5min,棄上清,室溫晾干。
10.用適量嘅DEPC H2O溶解RNA。
注意事項(xiàng)
1.成實(shí)驗(yàn)過(guò)程一定要防止Rnase嘅污染。
2.步驟(4)中將RNA溶液置65℃中溫育,然后冷卻至室溫再上樣嘅目的系有兩個(gè),一個(gè)系破壞RNA二級(jí)結(jié)構(gòu),尤其系mRNA Poly(A)落尾處二級(jí)結(jié)構(gòu),令Poly(A)落尾充分穿煲,從而提高Poly(A.)RNA嘅回收率;另外一個(gè)目的系可以解離mRNA與rRNA嘅結(jié)合,否則會(huì)導(dǎo)致rRNA嘅污染。所以此步驟唔省略。
3.十二烷基肌氨酸鈉鹽喺18℃以下溶解度下降,會(huì)阻滯柱(液體流動(dòng),若室溫低于18℃zuihao用LiCl替代NaCl。
4.寡聚(dT)-纖維素柱可喺4℃貯存,反復(fù)使用。次次使用前應(yīng)該依次用NaOH、滅菌ddH2O、上呀緩沖液洗柱。
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