腸出血性大腸桿菌O104：H4核酸檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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腸出血性大腸桿菌O104：H4核酸檢測(cè)試劑盒

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1.細(xì)胞嘅甲醛交聯(lián)與超聲破碎（*次）
1）拎出一平皿細(xì)胞（10cm平皿），加243 ul 37%甲醛，令到甲醛嘅終濃度為1%（培養(yǎng)基公司有9ml）。
2）37攝氏度哺育10min。
3）終止交聯(lián)：加甘氨酸至終濃度為0.125M。450 ul 2.5M甘氨酸于平皿中。撈勻后，喺室溫下放置5min即可。
4）吸盡培養(yǎng)基，用冰冷嘅PBS清洗細(xì)胞2次。
5）細(xì)胞刮刀有冇收集細(xì)胞于15ml離心理中（PBS依次為5ml，3ml同3ml）。預(yù)凍后2000rpm 5min有冇收集細(xì)胞。
6）又去上清。按照細(xì)胞量，加SDS Lysis Buffer。令到細(xì)胞終濃度為每200ul含2×106個(gè)細(xì)胞。噉每100ul溶液含1×106個(gè)細(xì)胞。再加蛋白酶抑制劑復(fù)合物。當(dāng)MCF7生滿板為5×106個(gè)細(xì)胞。本次細(xì)胞生得約為80%。即為4×106個(gè)細(xì)胞。就每理加400ul SDS Lysis Buffer。將2理?yè)茊找积R，公司800ul。
7）超聲破碎：VCX750，25%功率，4.5S沖擊，9S卡罅。公司14次。
2.除雜同抗體哺育（*次）
1）超聲破碎結(jié)束之后，10000g 4度離心10min。抹得甩唔溶物質(zhì)。
留羅300ul做實(shí)驗(yàn)，其余保存于-80度。
300ul中，100ul加抗體做為實(shí)驗(yàn)組；100ul唔加抗體做為對(duì)照組；100ul加4ul5MNaCl（NaCl終濃度為0.2M），65度處理3h解交聯(lián)，走電泳，檢測(cè)超聲破碎嘅效果。
2）喺100ul嘅超聲破碎產(chǎn)物中，加900ulChIPDilutionBuffer同20ul嘅五十×PIC。
再各加60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA。4度扽轉(zhuǎn)撈勻1h。
3）1h后，喺4攝氏度靜置10min沉淀，700rpm離心1min。
4）取上清。各留羅20ul做為input。一理中加1ul抗體，另一理中就唔加抗體。4度扽轉(zhuǎn)過(guò)夜。

いち）を取り出していちシャーレ細(xì)胞（10 cmシャーレ）に加え、243 ul 37％でホルムアルデヒド、ホルムアルデヒドのzui終濃度は1％（培地共有9ml）。
に）37℃10min孵化する。
さん）終瞭架橋：加グリシンからzui終濃度を0.125M。450 ul 2.5Mグリシン于平シャーレで?；旌厢?、室溫で放置すれば5min。
4）を盡くして培地、冷たいPBS 2回洗浄細(xì)胞。
ご）細(xì)胞を集め、15 mlスクレーパー細(xì)胞遠(yuǎn)心チューブ中（PBS順次5、3mlと3ml）。予備冷卻後2000rpm 5min収集細(xì)胞。
ろく）「清。細(xì)胞にLysis量によって、Buffer SDS。でzui終濃度を含む細(xì)胞ごとに200ul×106の細(xì)胞。こんな100ul溶液を含むすべての細(xì)胞がいち×106。エプロン抑制剤の複合物を追加します。仮にMCF7がいっぱい生えて板をご×106の細(xì)胞。今回の細(xì)胞の長(zhǎng)さは約80 %だった。つまり4×106個(gè)の細(xì)胞です。そのためそれぞれ管加入400ul SDS Lysis Buffer。に管を混ぜて、共800ul。
ななしち）超音波破砕：VCX750 25％、電力、4.5S衝撃、9S隙間。合計(jì)14回。
2 .雑用と抗體を除く（初日）
いち）超音波破砕終瞭後、じゅう、000gよんしよ度遠(yuǎn)心10min。不溶性物質(zhì)を除去する。
留學(xué)を300ul実験で、殘りの保存は-はちじゅう度。
300ulに加え、100ul抗體を?qū)g験組; 100ulプラス抗體を?qū)澱杖海?00ul加入4ul5MNaCl（NaCl終濃度を0.2M）、65度処理3h解架橋、走る電気泳動(dòng)、超音波破砕効果測(cè)定。
に）100ulの超音波破砕の制品の中で、加入900ulChIPDilutionBufferと20ulのごじゅう×PIC。
また各加入60ulProteinAAgarose / SalmonSpermDNA。よんしよ度回転混合1h揺れる。
さん）1h後、よんしよ℃靜置10min瀋殿物、700rpm遠(yuǎn)心1min。
よんしよ）とり清。各留を20ulをinput。一管の中に1ul抗體、一方の管の中には抗體を加えない。4度で夜を回る。